仪器分析 第六章 高效液相色谱分析法 任务1 认识高效液相色谱法.doc

江西环境工程职业学院教案（课程单元设计） 2学时 授课班级 授课时间 月 日 月 日 月 日 月 日 月 日 月 日 星期 星期 星期 星期 星期 星期 节次 节次 节次 节次 节次 节次 授课地点 教室+实训室 教学课题 （单元模块） 项目五 环境水体中痕量阿特拉津的测定 任务1 认识高效液相色谱法 教学目标 （教学目的的具体化） 一、知识目标：了解高效液相色谱的类型及选择原则、基本概念，掌握高效液相色谱法的基本原理，熟记高效液相色谱仪的结构 二、能力目标：认识常用的高效液相色谱仪及其配件 教学重点与难点 一、重点：高效液相色谱仪的构造 二、难点：高效液相色谱法的基本原理 教学内容及教学组织 教学内容： 高效液相色谱法的特点； 流程及主要部件； 主要分离类型与原理 教学组织： 本学习任务的教学以理论教学为主，由气相色谱法进行横向扩展，引出高效液相色谱法。讲解高效液相色谱法的特点，主要分离类型与原理；接着参观实验室，了解仪器结构，小组讨论仪器各个构件的作用，各小组代表发言，教师归纳；最后用一个视频把该任务的知识串联起来作为此次课的总结。 教学方法与手段 教学方法：启发式教学法，讲授法，发现法 教学手段： 多媒体课件、实物展示 技能训练项目 实验现象导入，小组分析讨论 作业  项目五 环境水体中痕量阿特拉津的测定 任务1 认识高效液相色谱法 ☆任务引入 横向扩展：流动相是气态的，称为气相色谱法；那么，如果流动相是液态呢？ ☆小组分析讨论 如果流动相是液态，则称之为高效液相色谱法，它们之间有何异同点？ 教师引导，引出本次的学习任务：认识高效液相色谱法 ☆知识讲解 一、高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 二、主要分离类型与原理 1、液-固吸附色谱 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 2、液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 3、离子交换色谱 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 4、离子色谱 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法 ☆参观实验室 高效液相色谱仪的构造及配件，小组讨论仪器各个构件的作用，各小组代表发言，教师归纳。 ☆教师归纳 一、流程及主要部件 1.流程：如图所示。 2.主要部件 (1) 高压输液泵：主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 (2)梯度淋洗装置 外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示： (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 (5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1m