培养基灵敏度验证方案.doc

培养基灵敏度验证方案 验证日的： 通过对培养基的灵敏度验证来增加无菌检查的可信度。 2 ?原理： 不同种培养基内加入符合其生长条件的已知菌株做生长实验，根据加入定量细菌的生长 情况来评价该培养基灵敏度。菌量越少说明培养基灵敏度越高。 仪器设备： 无菌室（操作间净化级别小于10000级，局部净化小于100级，室温18-26°c,相对湿 度40-60%）、恒温培养箱（30-35°C）.恒温培养箱（20-25%）.高压灭菌器、干烤箱（250。0、 相差显微镜等。 培养基：需气菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基，屮国药品检定所购买，生产批号: 980115）；真菌培养基（改良马丁培养基，屮国药品检定所购买，生产批号：980115）o 测试菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌、生抱梭菌。 验证实施 4?1培养基配制： 分别称取硫乙醇酸盐培养基7. 5克，改良马丁培养基7. 0克，分别加250ml蒸懈 水，热溶解，分装10ml/管，高压灭菌116弋20分钟。 4. 2测试菌的培养： 在无菌操净台内，分别取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、生抱梭菌菌液少量，接种在 硫乙醇酸盐流体培养基（10ml/管）屮，在30-35°C培养24小时；取白色念珠菌菌液少 量，接种在改良马丁培养基屮在20-25°C培养24小时。此时的培养液称为原菌液。 4. 3测试菌计数: 采用原菌培养液直接稀释、计数板计数法： 分别取己经培养好的原菌液1 ml,用生理盐水稀释10倍。 用一片干净的盖玻片盖在一干净计数玻片上。 吸少量含菌培养液接触盖玻片的边缘。 在相差显微镜400倍下观察，并且按一小方块所见的每一个细菌大约相当2x10’细 菌/ml计算细菌浓度。 4. 4原菌液稀释： 将上述原菌液根据细菌计数结果，分别用生理盐水稀释至10^100个菌/讷。 4. 5灵敏度实验： 分别将（4）稀释菌液1ml接种到（1）配制的10 ml/管培养基中,每种菌液接种3管 培养基，以未接种的培养基为阴性对照，按规定的条件培养5天并逐LI记录。 4. 6结果判定： 以每种菌液接种的培养基不得少于2管呈阳性，即该培养基的灵敏度符合要求。 附录： 附录1培养基配制记录 附录2培养基火菌测试记录 附录3测试菌培养观察记录 附录4测试菌计数记录 附录5测试菌稀释记录 附录6灵敏度观察记录 培养基配制记录 口期 培养基名称 培养某用量(g) 蒸憾水用量(ml) 配制人 复核人 培养基测试记录 培养基名称 温度 管数 测试结果 实验人 复核人 第天 第二天 第三天 附录3 测试菌培养观察记录 测试菌名称 温度 管数 生长情况 实验人 复核人  测试菌计数记录 测试菌名称 管号 结果(2x10?个/ml) 平均值(2xl07个/ml) 实验人 复核人 附录5 测试菌稀释记录 测试菌名称 管号 记数结果 稀释倍数 稀释菌含量 实验人 复核人  灵敏度观察记录 测试菌名称 管号 温度 观察结果 实验人 复核人 第天 第二天 第三天 第四天 第五天