4酵母菌培养观察与细胞计数学习资料.pdf

酵母菌培养、观察、鉴别与计数 实验目的 1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实 验方法； 2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别； 3 、明确血细胞计数板计数的原理； 4 、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 2 酵母菌简介 ▪ 酵母菌是不运动的单细胞真核生物,其大小通常比常见细菌大 几倍甚至十几倍。 ▪ 大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖；有性繁 殖是通过接合产生子囊孢子。 ▪ 本实验通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方 式。 3 酵母菌染色原理 ▪ 美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。用 美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细 胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的 还原型。 ▪ 具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或新陈代谢作 用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细 胞和活细胞进行鉴别。 4 直接计数原理 ▪ 显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别 的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的 常用微生物计数方法。 ▪优点是直接、简便、快速、直观； ▪缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。 5 实验内容 ▪ 第 Ⅰ部分：酵母菌死活细胞的观察鉴别 ▪ 第II 部分：血球计数板直接计数酵母菌 6 实验器材 1、菌种 YPD平板和液体培养2~3d的面包酵母或酿酒酵母 2、溶液或试剂 0.1％吕氏碱性美蓝染色液 3、仪器或其他用具 血细胞计数板、显微镜、血盖片、载玻片、盖玻片等 7 实验材料—划线培养的酵母菌 8 第I部分 酵母菌死活细胞的观察鉴别 酵母菌死活细胞的观察鉴别 1.在载玻片中央加一小滴生理盐 水，再加入30ul吕氏碱性美蓝 染色液，然后挑取少许酵母菌 放在染液中，混合均匀。 10 酵母菌死活细胞的观察鉴别 2、用镊子取一块盖玻片， 先将一边与菌液接触， 然后慢慢将盖玻片放 下使其盖在菌液上。 盖玻片不宜平着放下，以免产生 气泡影响观察. 11 酵母菌死活细胞的观察鉴别 3、将制片放置约3 min后镜检， 先用低倍镜后用高倍镜观察 酵母的形态和出芽情况，并 根据颜色来区别死活细胞。 4 、染色约0.5h后再次进行观 察，注意死细胞数量是否增 加。 5、思考怎样加速细胞的死亡？ 明视场观察 暗视场观察 12 火烧玻片后的酵母