植物组织和器官培养及种子制备.pptVIP

;本 章 内 容;本节课主要内容;一、毛状根培养生产次级代谢产物;1.毛状根诱导;在通常状态下，Ri质粒上Vir区的基因处于抑制 状态，当发根农杆菌感染寄主植物时，受损伤 的植物细胞合成的低分子苯酚化合物乙酰丁香 酮使Vir区处于抑制状态的基因被激活，产生一 系列限制性核酸内切酶，在酶的切割作用下产 生T-DNA链，T-DNA进入植物细胞核内，整合进 植物细胞的基因组。其整合和表达的结果导致 了大量毛状根的产生。; 2.毛状根诱导方法 （1）外植体接种法;（2）茎杆接种法;（3）原生质体—农杆菌共培养法;3.毛状根培养优点;4.毛状根在药用次生代谢产物中的应用;生物碱类(alkaloids)：孙敏等以长春花;皂苷类(saponins)：对人参的研究表明：以无菌 苗带叶幼茎为外植体诱导的毛状根中人参总皂苷 含量为2.486％(干重)。高于原药材总皂苷含量 1.403％(干重)。;5.毛状根培养的生物反应器;传统反应器改造;新型反应器设计:超声雾化反应器;第四节 人工种子;? 人工种子（ Artificial seed）：又称合成种子(Synthetic seed)或体细胞种子(Somatic seed)，是指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳(Artificial endosperm)和人工种皮(Artificial seed coat)中形成的类似种子的颗粒。 ; ? 结构上从外向里包括三部分：（1）人工种皮外层，保护胚状体中的水分免于丧失和防止外部力量冲击；（2）人工胚乳，含有必需的营养成分和某些植物激素；（3）胚状体或芽。;穆拉希吉 （Murashige）1978年在第四届国际植物 组织培养大会上首次提出研制人工种子的设想。 从20世纪80年代开始，美、日、法竞相掀起人工种 子研制的热潮。我国在1987年也将人工种子的研究 列入高技术发展计划（863计划）。;? （1）胚状体同步发育;渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。 通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯等）生成。可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。 分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育期的胚状体。;（2）人工种皮制作;（3）人工胚乳配制;藻酸钠等水溶性凝胶与Ca2+进行离子交换后凝固;海藻酸钠包埋示意图;贮藏与发芽;1、人工种子的优点 ? （1）便于运输和储藏（相对于试管苗）。 ? （2）人工胚乳可根据不同植物的要求配制，通 过加入植物激素、有益微生物或抗病、抗虫成分 ，使人工种子优越于天然种子。;2.存在的问题 ? （1）人工种皮性能不尽人意。 ? （2）还没有一种符合多数植物胚状体需要的人 工胚乳。; 举例： 一品红人工种子制作 为什么要制备人工种子：一品红又名圣诞花，属 大戟科。是在元旦和圣诞节前夕观赏;（1）愈伤组织诱导：;2，4-D/6-BA比例较高时(2.0/0.5)有利于愈伤组织诱导;（2）体细胞胚诱导; （3）包埋与萌发 ——海藻酸盐法 胚状体悬浮在3%的海藻酸钠+1/2MS培养基+6- BA0.5mg/L（分裂素）+GA3(赤霉素)0.5mg/L+ IBA0.5mg/L（生长素）+1.5%麦芽糖的混合液中(赤霉素 是生长调节剂，能促进不定胚发育成小植株) 滴入到2%氯化钙溶液里，络合15分钟，捞起，无菌水洗 涤，干燥成一定强度的人工种子胶丸。 播种在无激素的MS培养基上，25度，光照2000lx，12小 时/天，30天后计算萌发率。; ;1943年，white在体外培养感染了烟草花叶病毒（TMV）的马铃薯，并用枯斑寄主法测定了其根不同部位的病毒含量，发现根尖部位的病毒含量比其他部位少，甚至不存在病毒。随着往成熟区的推移，病毒含量越来越高。 这一发现为茎尖培养脱除病毒提供了理论依据。;黄瓜花叶病毒（CMV） 百合丛簇病（CTLV） ; ;番茄黄瓜花叶病毒病症　　　　　水稻矮缩病症;一、植物脱毒概念;（一）物理方法 1、高温处理法 脱毒原理： 一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40℃）易钝化失活，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。 （1）温汤浸渍处理脱毒法  材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。 适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 （2）热空气处理脱毒法  将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间 适用：多数植物 ; 热处理脱