t2噬菌体侵染细菌的实验教学参考.docx

T2 噬菌体侵染细菌的实验教学参考 1. 噬菌体侵染细菌实验概览 注：T2噬菌体中的“2”不是下标。另外，有些噬菌体的遗传物质是RNA授课 时不能将 T2 噬菌体等同于所有噬菌体。 噬菌体侵染细菌实验由多个相关的实验构成。这里给出相对完整的介绍（一 些参照用实验略去），目的是我们可以从中看到这些实验之间的连续性。 （1） 静止噬菌体颗粒的化学形态 利用渗透压突变获得空胞噬菌体。研究发现 S几乎全在“空胞”中，而DNA 则几乎全在溶液中。空胞是蛋白质外壳，能够保护 DNA 免受 DNase 破坏。 （2） 噬菌体吸附到细菌上后，其 DNA 变得对 DNase 敏感了 ①噬菌体吸附到活细菌上后，放在80C加热10min （细菌被杀死）,其DNA 变得对DNase敏感；②但该温度下不发生吸附的噬菌体对 DNase是不敏感的。 ③噬菌体吸附到活细菌上后，其 DNA对DNase是有抗性的。 以上事实表明：噬菌体吸附到细菌上之后，会将其 DNA释放（根据②，不 发生吸附的噬菌体 DNA 对 DNase 是有抗性的，只有将其 DNA 释放出来才能导致① 成立）；释放的 DNA 进入了细菌内部（释放的噬菌体 DNA 如果进入溶液中，这样 其DNA就会对DNase敏感，导致③不成立）；进入细菌内部的DNA受到活细菌的 保护，可以免遭DNase的破坏（从而③成立）。 （3） 噬菌体吸附到细菌的碎片上后，其 DNA 从噬菌体颗粒中释放出来 这一 部分和（ 2）的区别在于：（2）用完整细菌做实验，这里是用细菌细胞 的碎片进行实验。（ 2）和（ 3）的结论具有一致性。 （4） 从受侵染的细菌上去掉噬菌体外壳 通过搅拌将噬菌体和被侵染的细菌分开（剥离后的噬菌体位于上清液中） 。 分析表明可以将 75%-80%的噬菌体 S 从受侵染细菌上剥落下来，但只能剥离 21- 35%勺噬菌体P （这些数据都是上清液中，沉淀中的用1去减即可得到）。这表明 噬菌体所含的 S 大部分仍留在了细菌表面，噬菌体大部分的 DNA 在吸附后很快就 进入细菌内。——这一部分类似于教材分析上清液和沉淀的放射性。 5） 硫和磷从亲代向子代噬菌体的传递 对溶菌产物（溶菌但没有去除吸附在其表面的噬菌体，仅去除了未吸附的噬 菌体）进行分析：不带有子代噬菌体的早期溶菌产物（相当于对照或者本底）和 含有子代噬菌体的晚期溶菌产物各部分的 35S的部分是一致的，这说明在成熟的 子代噬菌体中几乎不含有35S。用32P做实验类似实验，表明大约有30%的P从 亲代噬菌体转移到子代噬菌体中去了。 （6）35S标记得到的子代噬菌体几乎没有其亲本的标记 这个实验与（5）的区别在于：（5）没有搅拌操作，即没有去除吸附在细菌 表面的噬菌体，（6）则进行搅拌去除了吸附在细菌表面的噬菌体。实验结果显示： 剥落噬菌体外壳，能在不同程度上降低各个部分中 35S的含量，尤其是含有大量 子代噬菌体的部分降低最为明显。这个实验说明：在溶菌产物各个部分中 35S都 应该来自于亲代噬菌体外壳中的35S――这一部分类似于教材分析 吸附的35S或噬菌体产 经剥落噬菌体外壳的细菌 不经剥落噬菌体外壳的细菌 量的百分数 35S 噬菌体 35S 噬菌体 在搅拌器中的洗提液 86 — 39 — 第一次低速离心沉淀 3.8 9.3 31 13 第二次低速离心沉淀 （0.2） 11 2.7 11 高速离心沉淀 （0.7） 58 9.4 89 高速离心上清液 （2.0） 1.1 （1.7） 1.6 回收 93 79 84 115 2?噬菌体侵染细菌实验的分析 上述实验（2）表明侵染时，噬菌体的DNA进入了细菌体内，实验（3）进 一步确认。明确了噬菌体 DNA进入了细菌体内之后，问题就是蛋白质有没有进 入，实验（4）主要就是解决这个问题，实验结果表明噬菌体 S大部分没有进入 细菌体内一一这样就建立最基本的认识：噬菌体 32P/DNA进入了细菌体内，而 含S的物质可能没有进入细菌内。实验（5）和（6）对上面的结论做了进一步的 确认。 我们能够发现教材处理该实验时并没有完全忠实于原始实验，这样的处理主 要是考虑理解上的方便。我们通过对原始实验的分析，能够看到原始实验主要关 心的问题就是侵染过程中：到底时蛋白质进入了细菌内？还是 DNA进入了细菌 内？ 赫尔希和蔡斯为什么如此关心哪种物质进入细菌内部这个问题呢？这是因 为：噬菌体的遗传物质必须进入到大肠杆菌体内用于指导子代噬菌体的合成，而不 能在大肠杆菌体内遥控子代噬菌体的产生。也就是说如果能够确认哪种物质没有进 入细菌内，就可以排除其是遗传物质的可能性；遗传物质需要从进入细菌的物质中 进行筛选。 注：进入大肠杆菌体内只是作为遗传物质的必要条件，而不是充要条件。也就 是说，进入大肠杆菌的物质不一定是遗传物质，