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第35讲基因工程
课堂探究 突破考点?提炼方法
探究一基因工程的概念及操作工具
1对基因工程概念的理解
别名
基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
操作对象
操作水平
基本过程
剪切t拼接t导入t表达
结果
人类需要的基因产物
与杂交育种相比
与诱变育种相比
原理
对操作工具的理解
TOC \o 1-5 \h \z (1) 在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶,目的是 。
(2) 不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都 (填写“相同”或者“不同”),同
一个DNA分子用不同的限制酶产生的黏性末端 (填写“相同”或者“不同”或者“可能相同” )。
(3) DNA连接酶与DNA聚合酶的区别?
(4)运载体具有什么特点?
(5) 标记基因的作用? 。
(6) 艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明 DNA是遗传物质做出了重要贡献,也可以说是基因工程的
先导,如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示,那么,这一启示是
【跟踪训练1】下列关于基因工程技术的叙述,正确的是 ( )
切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别 6个核苷酸序列
PCR反应中温度的周期性改变是为了 DNA聚合酶催化不同的反应
载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因
抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
探究二基因工程的基本操作程序
1完成基因工程的基本操作流程图:
依据相关信息回答问题:ONA~—一毎大力甬13ZA. jI反转以cONA O1NA )第二绘导人煜休呵胸第——少帶P4步楡测与峻盘注明:非编码序列包括非编码区和内含子的序列以mRNA为材料可以获得 cDNA
依据相关信息回答问题:
ONA
~—
一毎大力甬13ZA. j
I反转以
cONA O1NA )
第二绘
导人煜休呵胸
第——少
帶P4步
楡测与峻盘
注明:非编码序列包括非编码区和内含子的序列
以mRNA为材料可以获得 cDNA 其原理是 。
依据上图真核生物和原核生物基因结构的不同,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的
RNA序列的机制。从人的基因组文库中获得了基因 A,以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白 A,其原因
是
2.PCR技术
①原理是:
条件:
扩增过程:
②前提条件
目的是
a.
b.
C.
.( C):目的基因DNA受热变性后接连为单链
.( C) : 与单链相应互补序列结合
( °C):在 的作用下进行延伸 Taq 酶的特点是
PCR技 术
DNA复制
相 同 占 八、、
原理
原料
条件
不 同 占 八、、
解旋 方式
DNA在 下变性解旋
场所
体外复制
主要在细胞核内
酶
细胞内含有的DNA聚合酶
结果
在短时间内形成大量的 DNA片段
形成整个DNA分子
O
⑤PCR技术与 DNA复制的比较
3.构建基因表达载体的目的?基因表达载体的组成 ?启动子的作用?
【思考】用家蚕作为表达目的基因的受体,在噬菌体和昆虫病毒两种载体中,不选用 作为载体,
其原因是 。
4?将目的基因导入受体细胞
(1)什么是转化?
(2) 受体细胞是植物细胞, 转化的方法 ;受体细胞是动物细胞,
转化的方法 ;受体细胞是原核生物,转化的方法 。
(3) 农杆菌转化法的原理是
(4)原核生物作为受体细胞的特点: 。
将胰岛素基因导入原核生物表达成功后能否得到有生理功能的胰岛素? 原因是 ;
如何改进? 。
5?完成目的基因的检测与鉴定表,并加以理解、掌握:
类型
步骤
检测内容
方法
第一步
目的基因是否
上
(DNA 和 DNA之 间)
第二步
目的基因是否转录出 mRNA
杂交技术(DNA和mRNA之 间)
水平
第三步
目的基因是否翻译出蛋白质
蛋白质分子杂交(
杂交法)
水平鉴定
或 接种实验
[思维拓展]在整个工程中,哪个步骤不发生碱基互补配对?
2.请设计实验进行抗虫棉个体水平的抗虫实验
【跟踪训练2】为了增加菊花花色类型, 研究者从其他植物中克隆出花色基因 C (图1),拟将其与质粒(图
2)重组,再借助农杆菌导入菊花中。下列操作与实验目的不符的是
A .用限制性核酸内切酶 EcoRI和DNA连接酶构建重组质粒 B ?用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织,将 C基因导入细胞
C ?在培养基中添加卡那霉素,筛选被转化的菊花细胞
D ?用分子杂交方法检测 C基因是否整合到菊花染色体上
探究三基因工程的应用
写出获得生产生长激素的乳腺生物反应器的关键步骤
第一步:构建基因表达载体:选取 基因,在目的基因的 连接 的启动子,
并加上相应的终止子和标记基因。
第二步:用 技术将基因表达载体导入牛的 后,早期胚胎培养之后
选择 时期的胚胎进行 鉴定,选出雌性胚胎,再利用 技术,转入受体子
宫,最终获得转基因的牛。
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