瑞香狼毒根部潜在盐敏蛋白ScSrlk及其下游互作蛋白ScMPK6的鉴定及表达分析.pdfVIP

瑞香狼毒根部潜在盐敏蛋白ScSrlk 及其下游 互作蛋白ScMPK6 的鉴定及表达分析 摘要 瑞香狼毒是草原毒害草之一，它凭借自身极强的抗逆性在草原上蔓延，破坏了草 原的生态平衡。结合实验室前期进行基础实验对瑞香狼毒耐盐性的观测以及相关文献 报道，我们选择依赖其根部高效排盐机制而拥有耐盐性的瑞香狼毒作为研究材料。又 因为在蒺藜苜蓿和紫花苜蓿中发现类受体蛋白激酶Srlk 蛋白可以感知盐信号，但是 具体将信号传递到哪个下游蛋白是不清楚的。结合类受体蛋白激酶普遍以MAPK 家 族蛋白作为胞内信号传递蛋白，其中MPK6 蛋白能够激活SOS1蛋白应答盐胁迫，因 此我们在瑞香狼毒根部假定了一条盐信号传导途径，为了验证这一猜想，我们主要进 行了以下研究： （1）结合已报道的目标基因序列与瑞香狼毒转录组数据库中本地比对后，确定 序列号为c39384.graph_c0、c73211.graph_c1、c59271.graph_c0_seq6 的基因为目标基 ScMPK6 ScSrlk ScSOS1 Primer 5 Oligo 7 因，分别命名为 、 、 ，利用 、 软件设计引物， 然后以瑞香狼毒根部RNA 反转录的cDNA 为模板扩增目的基因，借助试剂盒将目的 基因成功构建到测序载体上进行测序比对。 2 ScMPK6 ScSrlk ScSOS1 （）然后对 、 、 基因的生物信息学进行分析，预测结果 如下：ScMPK6、ScSrlk、ScSOS1蛋白相对分子质量分别为44.2467k Da、66.83682k Da 127.13664k Da ScMPK6 ScSrlk ScSOS1 、 ， 、 蛋白具有亲水性， 蛋白具有疏水性； ScMPK6 蛋白没有跨膜结构域也没有信号肽，具有TEY 基序的活化环和CD 结构域； ScSrlk 蛋白序列主要分为胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，胞外包括信号肽和 5个亮氨酸重复序列，含有1个跨膜结构域，胞内结构域包括ATP 结合位点和蛋白激 + + ScSOS1 N 11 Na /H 酶大家族类似催化域； 蛋白 端包括了 个跨膜结构域是 交换区域， C 端包括3个保守功能域：环核苷酸结合结构域、SOS1蛋白自抑制区域、SOS2 蛋白 ScSrlk ScSOS1 ScMPK6 磷酸化位点； 、 蛋白锚定于质膜上， 蛋白游离于细胞核和胞 质中；ScMPK6 蛋白相对保守，ScSOS1蛋白与已知排盐植物的SOS1蛋白起源一致。 I 西北大学硕士专业学位论文 （3）利用荧光实时定量PCR 对盐胁迫处理下3个基因非保守序列的表达量进行 测定，ScSrlk 基因最先响应盐胁迫信号，表达量达到峰值持续积累一段时间后恢复至 初始表达量以下。ScMPK6基因表达量开始缓慢上升，之后激增到达最大值，又 迅速降至最低且不再有上升趋势。胁迫处理一段时间后ScSOS1基因表达量开始上升， 上升至最高值后开始缓慢恢复至初始水平。 4 ScMPK6 ScSrlk （）在体内利用双分子荧光互补技术验证 、 蛋白之间存在相互 作用，作用于细胞周围；在体外成功诱导表达出特异蛋白，通过蛋白免疫印迹技术确