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高通量二代测序仪
及
一代测序仪介绍
顾中恺 工程师
2014年10月
working_hclo@163.com
纲要
1. 一代测序简介
2. 高通量测序发展简介
3. 高通量测序原理
4. 高通量测序主要应用
2
1. 一代测序简介
3
ABI 3730xl 实样
Sanger 测序法原理
1977年，英国人Fred Sanger 发现，
如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会
产生一系列末端终止的DNA链，并能通过
电泳按长度分辨。
不同末端终止DNA链的长度是由掺入
到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。
由此诞生了以Sanger命名的测序原
理即双脱氧链终止法测序原理。
1980年第二次获诺贝尔化学奖。
Capillary
1 电进样及电泳
1. 毛细管和电极深入样品溶液中
2. 加电压
3. 荷负电的DNA分子进入毛细管
在电场作用下向阳极泳动
2 荧光激发和检测
1. 分别带4色荧光标记的DNA片段
从小到大依次经过激光检测区
2. 激光激发荧光
产生长波长的荧光信号
3. 荧光信号被冷CCD收集
4. 软件将光学信号转换成电泳图谱
ABI专利的荧光检测技术
每道毛细管同时检测 低温CCD实时检测
双束激光激发
多道毛细管同时检测 光栅全波长分光
3730xl 测序结果
2. 高通量测序发展简介
14
Roche 454 焦磷酸测序
Roche 454 焦磷酸测序
Pyrophosphate Sequencing
Pyrophosphate Sequencing
各厂商高通量测序
平台
Illumina Solexa‐HiSeq 合成测序
Illumina Solexa‐HiSeq 合成测序
Sequence by Synthesize
Sequence by Synthesize
High‐throughput sequencing
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