分子生物组(PCR)检测程序性能验证标准操作程序[参照].docx

标 准 规 范 20XX standard 意图建立分子生物组检测程序功能验证规范操作规程，使检测程序功能验证操作规范化。 适用规模选用基因扩增查验办法检测的一切项目。 责任或责任人 组长担任安排本组工作人员详细施行，并审阅陈述； 本组工作人员担任对适用规模内的检测程序进行验证操作，并编撰陈述； 技能主管担任监督本规程的施行； 质量主管参加对查验程序有效性的点评及辅导； 查验科主任担任同意检测程序的施行。 内容定量检测办法和程序的剖析功能验证内容至少应包含精密度、正确度、线性、丈量和/或可陈述规模、抗搅扰才能等。定性检测项目验证内容至少应包含测定下限、特异性、精确度（办法学比较或与金规范比较）、抗搅扰才能等。 正确度指该检测程序测定的成果与实在值或参考值挨近的程度。 验证办法：本组选用对照实验，将卫计委临床查验中心或湖北省临床查验中心的才能验证/室间质评的质控品、或已获认可的实验室的标本作为样品，以所用的检测程序对进行定量剖析，剖析成果与质控品靶值或比对实验室检测值进行比较，差错在可承受规模即可承受。 样品数量：至少5份，包含正常和反常水平或不同常见基因突变型； 频率：至少每年2次； 断定规范：关于定性实验，阴阳性应该共同；关于定量实验，应有≥80%的成果契合要求，卫计委临床查验中心才能和湖北省临床查验中心验证点评边界靶值分别为0.4和0.5，实验室间成果比对合格规范是偏倚±7.5%。 特异性指在或许其它成分（如其他病原体、内源物质等）存在的条件下，选用的办法能正确测定待测物的特性。关于核酸检测的特异性，主要是指核酸扩增过程中的特异性。 验证办法：取一份阴性标本，参加其他常见病原体高浓度核酸样本，进行10次独立的检测。 判别规范：调查并记载检测成果为阴阳性的差异。 精密度指在规则的测验条件下，同一个均匀样品，经屡次取样测定所得成果之间的挨近程度。一般以差错、规范差错或相对规范差错标明。 验证办法 重复精密度（批内精密度）：挑选具有医学决议水平的凹凸值标本，按规则的操作办法，在较短得时间内及安稳的条件下各作20次独立测定。核算其均值、规范差与变异系数。标本可用患者血清或选用质控品进行，所检测一切数据超出2SD的数据不能超越2个，不然应剖析失控原因纠正后从头进行实验。（可参照厂家阐明书） 中心精密度（批间精密度）：挑选室内质控作为衡量中心精密度的根据。选取至少2个月的质控数据（浓度最好为医学决议水平之内和之外）核算均值、规范差与变异系数。 重复精密度（批内精密度）与中心精密度（批间精密度）：接连测定5d，每天一个剖析批，每批凹凸两个浓度水平，每一个浓度水平同一样品重复测定3次。假如由于质量控制程序或操作问题判别一批为失控，应除掉数据，并添加履行一个剖析批；正常运用每日质控品。核算批内和批间规范差。 断定规范：批内精密度CV%应小于3/5总答应差错（TEa）；批间精密度CV%应小于4/5总答应差错（TEa）；假如批内精密度、批间精密度小于答应规模的，验证通过；假如批内精密度、批间精密度大于验证值，精密度验证未通过，从头验证或与厂家联络并获得协助。 检出限是极限实验的参数，指试样中被测物能被检测出的最低量。定量剖析的检出限有必要通过剖析适量的在检出限邻近的样品或剖析按检出限条件制造的样品的办法进行验证。 验证办法：选定一份浓度挨近制造商声明的检出限的样本，或选用高值样本用阴性血清进行稀释，进行20次独立测定。 判别规范：阳性率应≥95%，契合要求。 定量限指样品中被测物能被定量测定的最低值，其成果应具有必定的精确度和精密度。定量剖析的定量限有必要通过剖析适量的在定量限邻近的样品或剖析按定量限条件制造的样品的办法进行验证。 验证办法：选定一份浓度在线性规模下限左右的样本，或选用高值样本用阴性血清进行稀释，进行20次独立测定。 判别规范：剖析检测成果的SD值0.24，契合要求。 线性和丈量/可陈述规模：线性指在检测规模内，测验成果与被测物浓度呈正比联系的程度。 验证办法：取点评项意图高、低值患者标本各一份，（高值标本为挨近线性规模上限或略超越线性上限的标本，低值标本为检测阴性的标本）。用低值标本对高值标本按1∶10的份额进行倍比稀释，制形成系列浓度梯度的血清，使检出限上的点至少不得少于5个。每个样本标本重复测定3次，记载成果。一切样品应在一次运转中或几回距离很短的运转中随机测定，最好在一天之内完结。统计数据，除掉离群值，单个离群值可直接由数据组中除掉并进行重测，悉数样本无需从头测定。如发现多个离群值或数据点过于涣散，需查看形成此差错的或许原因，对或许原因进行纠正后，对悉数样本进行从头测定。求出3次测定成果的平均值和每一稀释度的预期值。以实测均值为X，以预期值为Y，在初步判别无离群值后，运用EXCEL软件进行二元一次的