生物制药与药品检验技术 寻找病毒“克星”系列之1—DNA的制备 课件：核酸类药物原料制备方法1-DNA的制备.pptxVIP

;项目三 核酸类药物的原料制备与分析检验;寻找病毒“克星”核酸类药物的原料制备方法 --DNA的制备;学习内容： （1）材料的选择与预处理 （2）DNA的提取与精制 （3）混合DNA的分离纯化 学习重点： DNA的提取、分离与纯化方法;一般用小牛胸腺或鱼精 0.14 mol/L 氯化钠溶液沉淀DNP：分离含有DNA的脱氧核糖核蛋白、含有RNA的核糖核蛋白 ;SDS溶液、氯仿-异戊醇溶液，沉淀蛋白质 95%乙醇沉淀DNA ;密度梯度离心法 柱层析法 凝胶电泳法;A．密度梯度离心法 蔗糖溶液作为分离介质，从管底向上，浓度降低，管底浓度为30%，最上面为5%。 高速离心数小时，大小不同的DNA分子分散在相应密度的蔗糖部位中。 从管底依次收集不同DNA样品，分别在260nm处测吸光度值，绘成曲线。 合并同一峰内的收集液，得到相应较纯DNA。;B．凝胶电泳法 目前应用很普遍的分离纯化核酸的方法 常用聚丙烯酰胺凝???和琼脂糖凝胶;C．柱层析法 优点：容量大，分离量可达毫克级甚至克级水平。 常用载体：DEAE（二乙氨基乙基）纤维素、葡聚糖凝胶、DEAE-葡聚糖凝胶以及甲基化清蛋白吸附于硅藻土（MAK）等。 混合DNA洗脱时，一般按分子量从小到大顺序，分步收集得到相应DNA。;①凝胶过滤层析 葡聚糖凝胶（Sephadex）、聚丙烯酰胺凝胶（Biogel-P）：孔径较小，适宜分离RNA等较小核酸分子 琼脂糖凝胶（Sepharose，Biogel-A）：孔径较大，适宜分离较大的DNA分子 ②离子交换层析 核酸的pI为2~2.5，在中性pH时带负电（磷酸残基），可与阴离子交换剂发生离子交换。常用DEAE纤维素。 ③其他方法 反相层析、羟基磷灰石柱层析、硝酸纤维素柱层析;总结：大分子DNA的制备方法