蛋白质加工与输送 高级生物化学教学PPT课件.ppt

* （二）分泌蛋白的靶向输送过程 合成肽链先由信号序列引导进入内质网 （endoplasmic reticulum, ER)， 蛋白质再分别被包装进分泌小泡转移、融合 到其他部位或分泌出细胞。 （1）信号肽被识别（2）核蛋白体转移到内质网膜（3）分泌肽进入内质网腔 * PDI是一种含有巯基的酶，能随机切断及催化蛋白质中的二硫键，使之正确重排，形成热力学上最稳定的构象。 PDI通过催化巯基与二硫键的交换反应，从而催化蛋白质二硫键的形成、还原（断裂）或重排（异构化）。 * 并不是所有的蛋白质都含有二硫键，特别是在细胞内的多数蛋白质是不含有二硫键的，因为细胞内的环境是个还原性的环境。 近年来的研究表明，蛋白二硫键异构酶也参与了对蛋白质功能的调节。 * 3.肽酰基一脯氨酰顺反异构酶，（peptidyl prolyl cis-trans isomerase, PPI） 脯氨酸为亚氨基酸，多肽链中肽酰一脯氨酸间形成的肽键有顺反两种异构体，空间构象差别明显。PPI可促进上述顺反两种异构体之间的转换。 天然蛋白肽链中肽酰一脯氨酸间肽键绝大部分是反式构型，仅6％为顺式构型。 在肽链合成需形成顺式构型时，PPI可使多肽在各脯氨酸弯折处形成准确折叠。 * 二、一级结构的修饰 场所：内质网、高尔基复合体的管腔中（外分泌蛋白前体的活化） （一）去除N-甲酰基或N-甲硫氨酸 　酶：脱甲酰基酶，氨基肽酶 结果：切除N-甲酰基 切除N-末端Met或N-末端一段AA * 蜂毒毒蛋白的加工成熟 蜂毒蛋白只有经蛋白酶水解切除N端的22个氨基酸以后才有生物活性。 * （二）个别氨基酸的修饰 1.氨基末端乙酰化 2.甲基化 3.氧化（-SH → -S-S-） 4.羧基末端的酰胺化 5.谷氨酸残基的γ羧基修饰 6. Pro, Lys OH 7. Ser, Thr, Tyr 磷酸化 * 1.氨基末端乙酰化 十分普遍，估计体内50%的蛋白质有氨基乙酰化。 在N-乙酰转移酶的催化下将多肽链的氨基末端（或氨 基酸残基侧链氨基）乙酰化。 有两组乙酰转移酶：分泌蛋白乙酰转移酶和非分泌蛋白乙酰转移酶，都以乙酰CoA为底物。 近年发现组蛋白的乙酰化在活化染色质，使它作为转录及复制的模板中起重要作用。 * 核小体中四种组蛋白各两分子构成的八聚体即核心组蛋白。 （多富含Lys残基） 它们的侧链氨基是乙酰化的位点。 * 2.甲基化 酶:甲基转移酶.存在:胞液(主要);细胞核(少量) 底物：S-腺苷蛋氨酸(SAM, 是Met活化产物），SAM的甲基被高度活化，称为活性蛋氨酸，是体内最重要的甲基直接供给体 甲基化位点：Lys,Arg, His的侧链；Gln的N-甲基化和Glu, Asp的O-甲基化. 腺苷转移酶 PPi+Pi + 甲硫氨酸 ATP S—腺苷甲硫氨酸(SAM) * * 3.氧化 蛋白质多肽链中进行氧化修饰最普遍现象是-- 二硫键的生成。 酶：二硫键异构酶 作用：肽链内或链间的Cys巯基氧化成二硫巯基。 * 4.羧基末端的酰胺化 肽链羧基末端的AA可出现酰胺化，如C端是Gly的蛋白 质常被酰胺化，保护它免受羧肽酶的降解。 酰胺化分两步： 1）Gly羟基化； 2）脱去一分子乙醛酸并产生新的酰胺化的羧端。 结果：缺失了原来作为羧基端的Gly. * 5.谷氨酸残基的γ羧基修饰 凝血酶原及其他涉及与钙离子相互作用的凝血因子如Ⅶ，Ⅳ和Ⅹ中均发现有羧基化修饰的羧化谷氨酸残基（Glu残基）。 部位：内质网 过程：在Glu残基的γ碳原子上添加羧基 结果：Glu的γ碳原子上有两个羧基 作用：能螯合钙离子，在凝血过程中起重要作用。 羧化酶 * 6.脯氨酸和赖氨酸的羟基化修饰 前胶原是成纤维细胞分泌的pr，在生物合成过程中新生的α肽 链进入内质网腔后，内质网中的脯氨酰-4-羟化酶和赖氨酰羟化 酶能分别识别肽链中的GlyXPro和GlyXLys序列，羟化Pro及Lys 残基。 产物：4-羟基脯氨酸（Hyp)及 δ–羟基赖氨酸（Hyl)残基。 原胶原分子中的Lys残基可在赖氨酰氧化酶的催化下形成醛赖氨酸（aiiysine). * （三）水解修饰 无活性的蛋白质前体→活性的蛋白质或多肽 如胰岛素的成熟 真核细胞大分子多