中药综合检验技术 吸光光度法 吸光光度法.docVIP

分析化学教研室 第十章 吸光光度法 【知识目标】 1．掌握：朗伯-比尔定律的意义及适用范围，光度法误差来源和测量条件的选择；单组分定量方法及其应用。 2．熟悉：物质对光的选择性吸收，吸收光谱的产生；分光光度计的基本构造。 【能力目标】 1．识记：光的性质；物质对光的选择性吸收，分子吸收光谱的产生；仪器的基本构造，主要部件及作用。 2．理解：透光率和吸光度，朗伯?比尔定律表示方法、偏离因素及适用范围；仪器测量误差，分析条件的选择。 3．应用：单组分定量方法及其应用。案例分析 案例分析10-1 国际空间站“生物实验室”安装了紫外?可见分光光度计 2008年2月7日亚特兰蒂斯号航天飞机搭载着欧空局研制的哥伦布舱升空，并成功地将其安装在国际空间站上。哥伦布舱装备了多种仪器设备，为人类进行科学研究提供了丰富的资源。哥伦布舱内搭载的“生物实验室”机柜安装了一台根据吸光光度法原理研制的具有实时在线检测能力的分析仪器——紫外?可见分光光度计，可对空间生命科学实验的过程产物进行在线检测。 问题： 1．何谓吸光光度法？有何特点？ 2．吸光光度法基本原理是什么？它在药物分析和食品检测中有哪些应用？ 吸光光度法(absorptiometry)又称分光光度法（spectrophotometry），是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。该方法具有灵敏度高、操作简便、快速、仪器设备简单、应用广泛、准确度高等特点, 是测定微量及痕量组分的常用方法。吸光光度法包括比色法、紫外及可见吸光光度法、原子吸收光谱和红外光谱法等。本章仅讨论可见光区的吸光光度法。 第一节 物质对光的选择性吸收和光吸收的基本定律 一、光的性质和物质对光的选择性吸收 （一）光的基本性质 光是一种电磁波，它既具有波动性，又具有粒子性，即波粒二象性。 1．波动性 光的反射、折射、偏振、干涉和衍射等现象，证明了光具有波动性。光的波动性用波长、频率及波数等主要参数来描述。在真空中波长、频率或波数的相互关系为 （10-1） （10-2） 式中c是光在真空中的传播速度，c = 2.997 924 58×108 m·s?1。 2．粒子性 光的吸收、发射以及光电效应等证明了光具有粒子性。光波是由一颗颗连续的光子构成的粒子流。光子是量子化的，有一定的能量，不同波长的光子具有不同的能量。光子的能量E和光波的频率（波数）或波长有以下关系。 （10-3） 式中h是普朗克（Planck）常数，其值为6.626 068 96（33）×10?34J·s。 (二)物质对光的选择性吸收 1．物质的颜色与光的关系 物质呈现何种颜色，是与光的组成和物质本身的结构有关。人的视觉所能感觉到的光称为可见光，其波长范围在400～760 nm。如果让一束白光通过棱镜，便可分解为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种颜色的光，这种现象称为光的色散。每种颜色的光具有一定的波长范围，理论上将具有同一波长的光称为单色光，包含不同波长的光称为复合光。白光是复合光，它不仅可由上述七种颜色的光混和而成，如果把其中两种特定颜色的单色光按一定的强度比例混合，也可以得到白光。这两种特定颜色的单色光就叫做互补色光。如图10-1中处于对角线关系的两种特定颜色光互为互补色光，如绿色光和紫色光互补，红色光和青色光互补等。 图10-1 互补色光示意图 物质的颜色就是因为物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。当一束白光作用于某一物质时，若物质选择性地吸收了某一波长的光，而让其余波段的光都透过，物质则呈吸收光的互补色光。例如，当一束白光通过KMnO4溶液时，KMnO4溶液选择性地吸收了绿色光（500～560 nm），而显现紫色。 2.物质对光的选择性吸收 光的吸收是物质与光能相互作用的一种形式。吸光物质具有吸光作用的质点是物质的分子或离子，当光照射到某物质后，该物质的分子就有可能吸收光子的能量而发生能级跃迁，这种现象叫做光的吸收。由分子结构理论知道，分子轨道能量具有量子化的特征，一个分子有一系列能级，包括许多电子能级、分子振动能级和分子转动能级。当物质分子对可见光的吸收符合普朗克条件：入射光能量与物质分子能级间的能量差△E相等时，这时与此能量相应的那种波长的光被吸收。即 （10-4） 式中△E为吸光分子两个能级间的能量差，或称为吸收光的波长或频率，h为普朗克常数。 连续光谱中某些光子的能量被物质吸收后，就形成了分子吸收光谱。由于不同物质的分子结构（能级差）不同，产生的分子吸收光谱也不同，即对光的选择性吸收