冷冻电镜简介[汇编].docxVIP

文档收拾 | 学习参阅 collection of questions and answers 1 冷冻电镜开展布景 人类基因组计划的完结，标志着科学已进入后基因组年代。尽管许多的基因序列得到说明，可是生物大分子怎么从这些基因转录、翻译、加工、折叠、拼装，构成有功用的结构单元，需要进一步的研讨。后基因组年代人类面对的一个应战是解析基因产品—蛋白质的空间结构，树立结构基因组学，并在原子水平上解说核酸—蛋白，蛋白—蛋白之间的相互效果，然后说明由这些生物大分子和复合物所行使的生物学功用。在此进程中，结构生物学在其间扮演着重要人物。对生物大分子结构的解析，不只具有深远的根底含义，并且具有宽广的运用远景。经过对核酸、蛋白质及其复合物的结构解析，人们对它们的功用的了解愈加透彻，就能够依据他们发挥功用的结构根底有针对性地进行药物规划，基因改造，疫苗研制开发，乃至人工构建蛋白质等作业，然后对制药、医疗、疾病防治、生物化工等诸多方面产生巨大的推进效果。 日前用于解析生物大分子空间结构的首要手法是X射线晶体学技能和核滋共振波谱学。X射线晶体学可给出分子的高分辩结钩，核磁共振波谱学则可测定分子在溶液中的准确构像，并可研讨构像的动态改变。尽管X射线晶体学和核磁共振波谱学是解析生物大分子结构的强有力东西，但各有局限性。X射线晶体学解析的结构常常是分子的基态结钩，而对解析分子的激发态和过渡态却往往力不从心：生物大分子在体内常常产生相互效果并构成复合物而发挥功用，这些复合物的结晶化十分困难。核磁共振波谱学虽可取得分子在溶液中的结构并可研讨结构的动态改变，但现在只能用于分子量较小的生物大分子（10000道尔顿），而对分子量大的生物大分子尤其是超分子复合物却力不从心。 人类对生物系统的研讨阅历了由个别到器官，由器官到安排，由安排到细胞，由细胞到生物大分子这样一个层次由高到低的进程。跟着科学的开展，人们对生物系统的研讨又转向由低层次到高层次，由简略系统到杂乱系统。在此进程中，细胞作为生命的根本单位起着承上启下的重要效果。多少年来，科学家的一个愿望是能调查到生物大分子在细胞内的行为，几十年来，人们对许多的生物大分子及其复合物运用电子显微镜进行研讨，开展出了强有力的电子显微学来研讨生物大分子结构的办法学。近年来，因为快速冷冻和低温冷却技能的引入，导致了冷冻电子显微学技能的诞生。冷冻电镜在研讨生物大分子结构尤其是超分子系统的结构方面取得了日新月异的开展，在生物学范畴的运用越来越受到重视，逐步成为一种被遍及承受的公认的研讨生物大分子尤其是超分子系统结构的有用研讨手法，成为衔接生物大分子和细胞的枢纽和桥梁。 2 冷冻电镜开展进程及分类 2.1 冷冻电镜开展进程 冷冻电子显微镜技能（cryo-electron microscopy）是在20世纪70年代提出的，早在20世纪70年代科学家们就运用冷冻电镜研讨病毒分子的结构，初次提出了冷冻电镜技能的原理、办法以及流程的概念。到了20世纪90年代，跟着冷冻传输设备、场发射电子枪以及CDD成像设备的呈现，冷冻电镜单颗粒技能呈现。21世纪初，冷冻电镜技能进一步开展，运用三维重构技能取得了二十面体病毒的三维结构，但此刻冷冻电镜的分辩率水平仍然没有得到打破，这约束了冷冻电镜在生物大分子范畴的运用，尽管冷冻电镜和X射线晶体学、核磁共振被称作结构生物学研讨的三大利器，但不得不供认冷冻电镜是三者傍边最弱的一种技能手法，在现在已解析的一千多种膜蛋白结构傍边，90%以上都选用的是X射线晶体学办法，核磁共振在小分子量的蛋白结构解析中也发挥了重要的效果，而冷冻电镜在蛋白结构解析傍边所起的效果微乎其微。 可是2013年12月5日，美国加州大学旧金山分校副教授程亦凡与搭档David Julius两个实验室协作，选用单电子计数探测器，以近原子分辩率（3.4埃），承认了在痛苦和热感觉中起中心效果的一种膜蛋白TRPV1的结构，这一振奋人心的效果让研讨人员们开端从头审视冷冻电镜在结构生物学研讨中的所能发挥的效果。究竟和X射线晶体学办法比较，它所需的样品量很少，也无需生成晶体，这关于一些难结晶的蛋白质的研讨带来了新的期望。蛋白质TRPV1结构的承认标志着冷冻电镜正式跨入“原子分辩率”年代。 2.2 冷冻电镜分类 现在咱们评论的冷冻电镜根本上指的都是冷冻透射电子显微镜，可是假如咱们以运用冷冻技能的视点界说冷冻电镜的话，冷冻电镜首要能够分为冷冻透射电子显微镜、冷冻扫描电子显微镜、冷冻蚀刻电子显微镜。 2.2.1 冷冻透射电子显微镜 冷冻透射电镜（Cryo-TEM）通常是在一般透射电镜上加装样品冷冻设备，将样品冷却到液氮温度（77K），用于观测蛋白、生物切片等对温度灵敏的样品。经过对样品的冷冻，能够下降电子束对样品的损害，减小样品的形变，然后得到愈加实在的样品描摹。 一