第三课时--动物细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 知识回顾 植物体细胞杂交过程 植物细胞 A（番茄） 植物细胞 B（马铃薯） 去除细胞壁 原生质体 A 原生质体 B 原生质体融合 杂种细胞 杂种植株(番茄马铃薯) 1、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 2、植物体细胞杂交诱导原生质体融合 常用的方法有哪些？ 3、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 无需，因为动物细胞无细胞壁。 物理方法：离心、振动、电激；化学方法：聚乙二醇 物理法：电激、振动、离心等 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒（最常用） 4、为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 融合过程 细胞膜融合 细胞质融合 细胞核融合（细胞融合完成的标志） 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 细胞准备（两亲本细胞混合培养） 细胞融合 杂种细胞选择 杂种细胞克隆 （一）. 动物细胞融合过程 融合后试管中有几种细胞的存在？ A B 5种：AA BB AB A B 选择培养基： 亲本细胞死亡，自融细胞死亡，Only杂种细胞存活 取材：胚胎或幼龄动物的器官组织 细胞杂交：不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 产生杂交细胞（or杂种细胞），即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 （三）. 结果 2.最重要的用途是制备单克隆抗体。 （四）. 意义 （二）.原理： 细胞膜的流动性。 1.细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 强调：浆细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。 二、单克隆抗体 B淋巴细胞 浆细胞 记忆B淋巴细胞 分化 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差 单克隆抗体！ 提示1：对B细胞进行细胞培养，可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。 2.2单克隆抗体的制备 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 骨髓瘤细胞能无限增殖 + 一个浆细胞只分泌一种特异性抗体 设计方案： （一）.单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过克隆形成的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 （二）.单克隆抗体的制备过程 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有几种两两融合方式？ ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ ④ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ ⑤ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞 克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 体内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 2.3单克隆抗体的应用 （1）诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 人绒毛膜促性腺激素是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白 ，妊娠第8天，在血清和尿中可以检测到 抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体