生物制药工艺 淀粉酶的发酵制药 淀粉酶的发酵制药.pptxVIP

生物制药工艺课程淀粉酶的发酵制药 α－淀粉酶生产工艺 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称，是最早实现了工业生产并且是迄今为止用途最广、产量最大的一个酶制剂品种。 主要的淀粉酶可分为四大类：α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶（糖化酶）和异淀粉酶。 这些淀粉酶中比较重要的是α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。 枯草菌BF7658，α-淀粉酶是我国产量最大、用途最广的一种液化型α-淀粉酶，广泛应用于食品制制药、纺织等许多方面。菌种微生物培养法微生物培养条件细菌液体深层发酵中性至微碱性霉菌固体曲法微酸性一般在酶活达到最高峰时结束发酵，离心以硅藻土作为助滤剂去除菌体及不溶物。在钙离子存在下低温真空浓缩后，加入防腐剂、稳定剂以及缓冲剂后就成为成品。 为制造高活性的淀粉酶并便于贮运，可把发酵液用硫酸铵或有机沉淀剂沉淀制成粉状酶制剂，最好贮藏在25℃以下、较干燥避光的地方。 利用蛋白酶比淀粉酶的耐热性差的特点，将α－淀粉酶的发酵液加热处理可以使淀粉酶的储藏稳定性大为提高。在培养基中添加柠檬酸盐可抑制某些菌株产生的蛋白酶，用底物淀粉进行吸附也可将淀粉酶和蛋白酶进行分离。粉碎↓抽提↓过滤↓沉淀↓压滤↓烘干↓成品↓供助消化药、酿造等用试管斜面培养基↓三角瓶种子↓种曲培养↓厚层通风培养↓烘干↓粗酶制剂↓酿造等用←调配（一）米曲霉固态法α-淀粉酶生产工艺1. 生产工艺流程1. 原料麸皮、米糠、稻壳、木薯粉、豆饼浸出液2. 发酵将试管斜面（于32-34℃培养70-72h），接种到500mL三角瓶（每瓶一菌耳种菌），摇匀于32-34℃下培养3d，每24h扣瓶一次以防结块，待菌体大量生长孢子转出黄绿色时，即可作为种子用于制备种曲。种曲房要保持清洁，并定期用硫磺和甲醛熏蒸灭菌。种曲培养一般采用木制或铝制曲盒，培养基经高温灭菌后放入种曲箱房，打碎团块冷却到30℃左右接入0.5～1％的三角瓶种子，拌匀后放入曲盒，料层厚度1cm左右为宜。盒上盖一层布后放入专用的木架上，曲房内保持30℃左右进行培养。盖布应每隔8～12h用水浸湿，以保持一定湿度，每24h扣盘一次，经3d后，种曲成熟，麦麸上布满黄绿色孢子。厚层通风固体发酵，蒸煮1h后培养基冷却到30℃接入0.5％的种曲，拌匀后入池发酵。前期品温控制在30℃左右，每隔2h通风20min，当池内品温上升至36℃以上时则需要连续通风，使温度控制在34～36℃。当池内温度开始下降后2～3h则通冷风使品温下降到20℃左右出池，整个发酵过程约需要28h。2. 提取直接把麸曲在低温下烘干，作为酿造工业上使用的粗酶制剂，特点是得率高、制造工艺简单，但酶活性单位低，含杂质较多。把麸曲用水或稀释盐水浸出酶后，经过滤和离心除去不溶物后用酒精沉淀或硫酸铵盐析，酶泥滤出烘干，粉碎后加乳糖作为填充剂最后制成供作助消化药、酿造等用的酶制剂。特点是酶活性单位高，含杂质较少，但得率低、成本高。（二）枯草杆菌BF-7658深层液体发酵 α-淀粉酶生产工艺 枯草杆菌BF-7658淀粉酶是我国产量最大、用途最广的一种液化型α-淀粉酶，其最适温度65℃左右，最适pH6.5左右，pH低于6或高于10时，酶活显著下降。其在淀粉浆中的最适温度为80～85℃，90℃保温10min，酶活保留87％。热处理↓盐析↓压滤↓干燥↓粉碎↓混粉↓成品无菌空气BF-7658菌种↓孢子斜面↓种子罐↓发酵罐↑←硫酸铵→硫酸铵废液补料罐←填充料1. 生产工艺流程2. 生产工艺操作孢子培养一般采用马铃薯培养基，于37℃下培养72 h，使 菌体全部形成孢子即为成熟。茄子瓶(1). 斜面用50 ml无菌生理盐水洗下(2). 孢子悬浮液(3). 种子及发酵培养工艺配方 种子培养基的组成为豆饼粉、玉米粉、NaHPO4、(NH4)2SO4、CaCl2、NH4Cl等。在37℃、搅拌转速300r/min、通气量1：（1.3-1.4）体积比的条件下培养12-24小时（对数生长期） 碳源：淀粉、玉米粉、木薯粉、浓度为2-8％。 氮源：工业上常用玉米浆、豆饼粉、硫酸氨和硝酸钠等。 无机盐：钙离子对酶的稳定有利，适当的磷盐有利于酶的产生，锰锌铁对微生物产酶有刺激作用 发酵温度37℃、搅拌转速200r/min，通气量0-12小时1：0.67-0.74，12小时发酵结束1：（1.0-1.33），周期为40-48小时。补料从12小时开始，每小时一次，分30余次补完，补料体积相当于基础料的1/3，停止补料后6-8小时，温度不再上升，菌体衰老，酶活不再升高，发酵即可结束，发酵完毕，发酵液中加入2％CaCl2和0.8％Na2HPO4，并加热至50-55℃维持30分钟，（破坏蛋白酶，促使胶体凝聚），然后冷却到40℃进行提炼。种子及发酵培养工艺配方 种子罐3M3发酵罐30M3总配比基料补料豆饼粉45.65.35.5玉米粉3117.