武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究.docVIP

武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究?农学论文 武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究 刘达玉1,王慧超2,郑林用3，戴玄2,李宗堂4,陈今朝2 (1?成都大学生物产业学院，成都61010 6 ; 2 .长江师范学院生 命科学与技术学院，重庆4 0 8 1 0 0 ; 3 .四川省农业科学院，成都6 1 0066;4.成都榕珍菌业有限公司，成都611733) 摘要：对武陵山羊肚菌(Morchella esculenta)的液 体培养条件、培养基进行了优化。结果表明，最适液体培养条件为pH 6 . 0、 培养液装量1 0 0 mL / 2 5 0 m L、接种量8%、温度2 5 °C.摇床转速 18 0 r /mi n、培养时间6 d ;最适发酵培养基为4?0 %蔗糖、0 . 7 0 % 酵母粉、0 . 15% K 2 H PO4 和 0 ? 10% MgSO4?7H2O。 在此条件下，菌丝体干重为6 . 8 8 0 g / L ,胞外多糖产量为0?8 6 1 g / L。 关键词：武陵山羊肚菌(Morchella esculenta);液 体培养；菌丝体；胞外多糖 中图分类号：Q 9 4 9 . 3 2 文献标识码:A 文章编号： 0 4 3 9 ? 8114(2015)02 ?0 405 ?04 DOI :1 0 .1 4 0 8 8 / j .c n k i ?i s s n 0 4 3 9 .2 0 15 . 02.037 羊肚菌(Morchella esculenta)是一种营养丰富、美 味可口的珍贵食药用菌，其性平、味甘，益肠胃、化痰理气，补肾、壮阳，补脑、 提神,具有增强肌体免疫力、抗疲劳、抗衰老、降血脂、抗病毒和抑制肿瘤等功 能［1 , 2 L虽然国内外已有一些羊肚菌人工栽培的报道，但由于其对气候、 土壤等环境条件要求苛刻，至今仍未实现规模化栽培［3?6 I自然资源很少, 远不能满足市场需求。为此，笔者分离重庆武陵山羊肚菌，并对其液体培养条件 进行了优化，拟为其人工栽培、食品和药品开发提供依据。 1材料与方法 . 1材料 菌种:武陵山羊肚菌,长江师范学院生物技术实验室分离保存。 母种P DA培养基:2 0%马铃薯（去皮）煮汁，2 . 0%葡萄糖，0 . 3 0 %蛋白月东，1 ? 8 % 琼脂,0.10% K2HPO4, 0.0 5%Mg SO 4-7H2O , pH自然［7 L 液体种子培养基：1 0 %马铃薯煮汁，2 . 0 %葡萄糖，0 . 5 0 %蛋白月东, 0. 10%K 2 H PO4 , 0 .0 5%MgSO4,pH 6.0 [8」 发酵培养基：4 . 0 %葡萄糖，0 . 5 0 %蛋白月东，0.1 0%K2HPO 4,0 .0 5%Mg SO4-7H2O # pH 6.0。 1?2方法 1.2.1菌种活化把保藏的羊肚菌母种转接到无菌PDA培养基平皿 上，2 5 °C培养7 d，备用。 1 . 2 . 2液体培养方法将种子培养液装入2 5 0 mL锥形瓶中，每 瓶 10 0 mL ; 0.10 MPa、12 1 .3 °C 灭菌 2 0 m i n ,冷却，接 羊肚菌母种于锥形瓶中,160 r /mi n. 2 5 °C培养3 d备用［9 L发 酵培养液装量同种子培养液,培养条件相同,培养时间6 d。 1?2 . 3发酵培养基选择选取蔗糖、酵母粉、K2HPO4. Mg S O4-7H2O 4个因素，设计L9 （ 34 ）正交试验，因素与水平见表1。通 过试验，筛选最佳培养基配方。 表1因素与水平 因索〃％ 蔗糖⑷ 酵母粉（〃） MgSO4-71U)(D) 1 35 0.30 0.05 0.050 厶 4.0 0.50 0.10 0.10 3 4.5 0.70 0.15 0.15 . 2 . 4 菌丝体干重测定 取发酵液3 0 m L ,在4 0 0 0 r/mi ri离心1 0 mi n，沉淀菌丝体用去离子水洗涤3次，于7 0 °C下烘干至恒重, 称重,每个处理重复3次。 1?2 . 5羊肚菌胞外多糖测定 参照武秋立等［10］的方法,取岀菌 丝体羊肚菌发酵液加入3倍乙醇于0 °C下沉淀12 h ,于4 0 0 0 r /mi n离心1 0 min;弃上清液,沉淀加少量乙醇再离心，重复两次后，将沉淀 用去离子水溶解走容，用硫酸■蔥酮法于6 2 0 nm处测吸光度,根据硫酸? 蔥酮葡萄糖标准曲线计算胞外多糖产量。 1?2 . 6 数据处理试验数据用D PS 7 . 0 5版软件处理，用L S D法比较菌丝体干重和多糖的差异显著性。 2结果与分析 2.1液体培养条件选择 .1 .1 pH对菌丝体干重和多糖产量的影响 用2 .0 mo 1/L HCI 或氢氧化钠溶液调节培养液p H分别为4?0、5.0、6?0、