生物技术概论3.2-5 植物细胞工程及其应用.pptVIP

一、细胞培养技术 细胞培养是细胞工程中的一项重要技术，各种生物技术无不与细胞培养有关。 指动，植物，微生物细胞在体外条件下的保存和生长，在培养的过程中不再形成组织。 操作步骤： 取材与除菌 配置细胞培养基，并且将生物材料接种于培养基中 将接种后的培养基放置到培养室或培养箱中培养。 二、细胞融合技术 细胞融合技术又叫体细胞杂交，指采用人工或自然的方法使两个或两个以上的不同细胞（或原生质体）融合为一个细胞，不经过有性过程而得到杂种细胞的方法。 操作过程：制备原生质体 诱导细胞融合 筛选杂合细胞 三、细胞拆合技术 细胞拆合技术又称细胞重组技术，指从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后将不同细胞来源的细胞器在体外一定条件下进行重组，使其重新装配成具有生物活性的细胞或细胞器的一种试验技术。 细胞拆合的方式基本分为以下3种； (一)胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种。 (二)微胞体与完整细胞重组形成微细胞异核体。 (三)胞质体与核体重新组合形成重组细胞。 细胞拆合包括核移植和细胞器移植。 现代动物胚胎工程的概念涵盖所有对动物配子和胚胎进行工程化操作的技术方法， 主要分为四大类技术体系： 第一类是胚胎移植相关技术，包括超数排卵与胚胎移植(multiple ovulation and embyo transfer，MOET)技术、胚胎体外生产技术、胚胎移植前性别鉴定技术与动物性别控制技术、卵母细胞与胚胎的冷冻保存技术； 　　 第二类为动物克隆技术，包括胚胎分割技术、细胞核移植技术和胚胎嵌合技术体系； 第三类为转基因动物技术； 　　 第四类为胚胎干细胞技术。 　　。 第三节 植物细胞工程（plant cell engineering） 几个基本概念 植物组织培养 植物细胞培养 原生质体培养与体细胞杂交 单倍体育种 人工种子  一、几个基本概念 全能细胞（totipotential cells） ：能够表达生物体基因组的任何一种基因，并能分泌出该物体内任何一种细胞，并进而发育成为一个完全相同的的生物体的细胞。 外植体（explant ）：指植物组织培养过程中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官，组织，细胞和原生质体。 原生质体（trophoplast ）：指除去全部细胞壁的细胞，仅有细胞膜包裹，呈圆形，要在高渗液中才能维持细胞的相对稳定。 胚状体（embryoid）：组织培养中起源于非合子细胞，经过胚胎发生于胚胎发育而形成的胚状结构。 继代培养（successive transfer culture）： 指遇伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养缺乏，水分散失，代谢产物积累等原因，需将这些组织转移到新的培养基上，这种转移就叫做继代培养或传代培养。 三、植物细胞培养 （一）、植物细胞培养的基本方法 根据培养对象，植物细胞培养主要有单细胞培养，单倍体培养、原生质体培养等， 按照培养系统的不同又可分为悬浮培养、液体培养、固体培养、固定化培养等。 单倍体培养主要指花药培养，即将花药在人工培养基上进行培养，从小袍子直接发育成胚状体，然后长成单倍体植株；或通过愈伤组织诱导分化出芽和根，最终长成植株。 原生质体培养指将原生质体置于无菌培养基上分裂、分化，最终形成植株。不同植物的原生质体融合后可获得体细胞杂交株。 固体培养是在微生物培养基础之上发展起来的植物细胞培养方法，一般在培养基中加入一定比例的琼脂，故又称琼脂培养； 固定化培养是固体培养的一种，但不是使用固体培养基，而是将细胞包埋在惰性支持物的内部或贴附在其表面上，这样有利于细胞的分化和组织化，也利用对环境因子参数的调控。常见的固定化细胞培养系统有以下两大类：平床培养系统和立柱培养系统。 液体培养一般可分为两种：静止培养和振荡培养。静止培养适用范围较窄，常用于某些原生质体的培养。振荡培养需要摇床或转床等设备。 细胞悬浮培养属于液体培养的一种，通过机械或气体搅拌实现细胞的悬浮，是植物大规模培养的主要方式。与微生物培养相似，植物细胞的悬浮培养也包括分批培养、半连续培养(流加培养)和连续培养3种方式。 （二）、植物单细胞培养 植物单细胞培养主要是观察细胞个体是如何进行分裂、分化、生长及发育，为植物细胞的大规模培养奠定基础。 1．单细胞的制备 通常采用的方法有机械法、酶解法和愈伤组织诱导法。 2、单细胞培养方法 (1)平板培养法： (2)看护培养法： (3)饲养层培养法： (4)液体浅层静置培养法： (5)细胞悬浮培养法： （三）植物细胞的生物反应器的大规模培养 悬浮培养： 1、生物反应器的选择： 适合植物细胞悬浮培养的