经典生物化学课件6核酸.ppt

真核生物内，DNA以致密形式存在于细胞核的染色体中。 染色体的基本单位是核小体 核小体：DNA和组蛋白共同构成 核心组蛋白：4种组蛋白(H2A , H2B , H3 ,H4)形成的8聚体 DNA：以负超螺旋缠绕在核心组蛋白上 H1在核小体之间起连接作用 染色体的基本单位是核小体(nucleosome) 核小体的串珠状结构 RNA是单链分子，因此，在RNA分子中，并不遵守碱基种类的数量比例关系，即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。 （三）RNA的高级结构 发夹式结构 A-U, C-G配对 RNA分子中，部分区域也能形成双螺旋结构，不能形成双螺旋的部分，则形成突环。这种结构可以形象地称为“发夹型”结构。 1. tRNA的二级结构 呈“三叶草” 形状，一般可将其分为四臂四环：大致分为氨基酸臂、二氢尿嘧啶环、反密码子环、额外环和TΨC环五部分 。 2. tRNA的三级结构 tRNA三叶草结构进一步扭曲、折叠形成倒写“Ｌ”字母的三维结构。 tRNA的二级结构与三级结构 倒‘Ｌ’结构 三叶草结构 3. rRNA的高级结构 rRNA的种类（根据沉降系数）： 真核生物： 　　 5S rRNA 　　 28S rRNA 　　 5.8S rRNA 　　 18S rRNA 原核生物： 　　 5S rRNA 　　 23S rRNA 　　 16S rRNA 5S rRNA 与16S rRNA DNA碱基组成的特点: 具有种的特异性; 没有器官和组织的特异性； 年龄、营养状况、环境的改变不影响DNA的碱基组成； DNA的碱基组成符合碱基摩尔比例规律。 DNA碱基摩尔比例规律 在各种DNA中，腺嘌呤与胸腺嘧啶的摩尔数相等，即A＝T，鸟嘌呤与胞嘧啶 (包括 5-甲基胞嘧啶 )的摩尔数相等，即 G ＝ C + m5 C； 即嘌呤碱基的总摩尔数等于嘧啶碱基的总数： A + G ＝ T + C + m5C 这个碱基摩尔比例规律又称为DNA的碱基当量定律，Chargaff’s rule。 2. DNA测序（sequencing） 核酸序列测定方法已经过近20年的发展，测序的具体方法种类繁多。但所依据的基本原理不外乎Sanger的核酸链合成终止法及Maxam和Gilbert的化学降解法两大类。 将被测 DNA 制成单链模板，分别加入 4 个反应管中 在每个管中加入引物、缓冲液、DNA 聚合酶 和 4 种 dNTP（其中一种为32P标记）； 在 1、2、3、4 个管中分别加入 ddTTP、ddCTP、ddGTP 和 ddATP ，然后进行保温反应。 由于双脱氧的 ddNTP 比正常的 dNTP 少了3’-羟基，当它在 DNA 聚合酶作用下掺入到正在延伸的 DNA 链时，因 ddNTP 不含 3’ -羟基，于是就阻止了其它 dNTP 的继续掺入，起了特异性终止剂的作用。 Sanger法的程序 双脱氧链终止法 DNA的自动测序 二、RNA的一级结构与序列分析 RNA一级结构：主要为4种核苷酸AMP、GMP、CMP 、UMP通过磷酸二酯键连接而成的没有分支的多核苷酸链，RNA 分子中还有某些稀有碱基。 RNA种类不同，结构各不相同。 1. mRNA的结构与功能 占细胞中RNA总量的3％～5％； 细胞内mRNA的种类很多，分子质量极不均一； mRNA是三类RNA中最不稳定的; 作为模板，直接指导蛋白质的合成。 真核mRNA 5’ 端的帽子结构 7-甲基鸟苷三磷酸与 mRNA 原来的5’端核苷酸连接形成m7GpppN。其作用是： mRNA的稳定性维系：作为一种保护装置将mRNA 5’端封闭起来，可使mRNA免受核酸外切酶的水解破坏； 翻译起始的调控：作为蛋白质合成起始的辨认信号，启动和加速翻译过程。 mRNA核内向胞质的转位 帽子结构 真核细胞的mRNA 3’ 末端的结构 大多数真核细胞mRNA在3’ 末端有一个长约 200个核苷酸的polyA; PolyA是在转录后经polyA聚合酶的作用添加上去的，原核生物的mRNA一般无3’PolyA; 功能：与mRNA从细胞核到细胞质的转移有关；与mRNA的半衰期即稳定性有关（新合成的mRNA其PolyA 链长，而衰老的mRNA其PolyA链较短）。 tRNA皆由 70～90 个核苷酸组成，有较多的稀有碱基；在三类 RNA 中它的分子质量最小。 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G也有pC的 2. tRNA的一级结构特点 3. RNA的测序 利用酶的特异性，将RNA的特异核甘酸位点切断