营养缺陷型菌株筛选.ppt

诱变育种 诱变剂 诱变育种步骤 物理诱变剂 化学诱变剂 出发菌株的选择 单孢子悬液的制备 菌丝尖端法 处理菌落周围的尖端菌丝 混合培养法 原生质体是异质的 不具有细胞壁 不产孢子的菌株诱变时会有遗传 分离或遗传不稳现象 诱变处理 诱变剂种类选择 最适诱变剂剂量的选择 诱变剂的处理方式 影响突变率的因素 1 、菌种的遗传特性不同 2 、菌体的细胞壁结构不同 3 、环境条件的影响 ①诱变前预培养和诱变后培养 ②温度、 pH 、氧气等外界条件 对诱变效应的影响 ③平皿密度效应 第三节营养缺陷型菌株的筛选 营养缺陷型在生产上和科学研究上用 途很大。 目前生产氨基酸、核苷酸的菌种都是 各种类型的缺陷型。 研究代谢途径，育种技术都必须有营 养缺陷型的菌株为材料。 营 养 缺 陷 型 的 用 途 一、基本概念 二、筛选营养缺陷型的步骤 （一）诱变 （二）淘汰野生型 （三）检出缺陷型 （四）确定生长谱 1 、野生型菌株（ wild type strain ） 2 、营养缺陷型（ auxotroph ）： 指通过诱变而产生的 缺乏合成 某些营养物质 如氨基酸、维生素和碱基等的能力，必须在其 基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生 长的变异株。 3 、原养型（ prototroph ）： 营养缺陷型菌株经 回复突变 或 重组变异 后产 生的菌株，其营养要求在表型上相同。 一、基本概念： 与之有关的培养基有三类 1 、基本培养基 (MM) ： minimal medium 能满足野生型菌株正常生长的培养基； [-] 2 、完全培养基 (CM) ： complete medium 能满足各种营养缺陷型营养要求的天然或半 合成培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁 培养基； [+] 3 、补充培养基 (SM) ： supplemental medium 在 基 本 培 养 基 中 加 入 相 应 的 营 养 成 分 ； [A][B] 二、筛选营养缺陷型的步骤 ? 诱变 ? 淘汰野生型 ? 检出缺陷型 ? 确定生长谱 （一）诱变方法 用于诱发营养缺陷型的诱变剂有： ? 亚硝基胍 ? 紫外线 ? 亚硝酸 1 、抗生素法： 原理： 一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制霉菌素。 2 、菌丝过滤法： 对于霉菌，因孢子生长后会长 出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而 缺陷型孢子却因未发芽而不能滤过。 3 、高温杀菌法： 利用芽孢菌类的芽孢和营养体 对热敏感性的差异。 （二）淘汰野生型 MM CM CM MM MM CM 加青霉素 （ 三）缺陷型的捡出 ? 原理： 缺陷型在 CM 上生长良好，而在 MM 上则不生长，野生型都能生长。 ? 具体方法： 影印法、点种法 夹层法 、限量补充法 无营养缺陷 MM MM+F CM 其他营 养缺陷 F 营养缺陷 （ 1 ）将一较平皿直径小 1cm 的金属圆筒蒙上一层灭 菌的丝绒，用金属夹夹住，灭菌。 （ 2 ）完全培养基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻 一压，使之成为印模，标记方位。 （ 3 ）将基本培养基平皿和完全培养基平皿在标记 的 同一方位 上先后轻轻一压，此菌印模即复印 于上。 １、影印法 （ 4 ）将 CM 和 MM 在恒温箱中培养。 （ 5 ）二平皿相同方位进行比较，即可发现在 MM 平皿上长出的菌落少于 CM 平板上的。 MM 上未长 而相应于 CM 上长出的那几个菌落就可能是缺陷 型。 此法要求平皿上菌落不能太多，菌落之间应 有一定间隔。 MM CM ２、点种法 ? 用接种针或牙签将 CM 上长出的菌落在 MM 和 CM 两副平板上接种，依次在相应位置点种，然后 一起培养，观察其生长情况。 ? 此法结果明确，但工作量大。 CM CM MM