细菌染色和涂片的观察的方法.pptVIP

③、选择抗菌药物：GP菌和GN菌在细胞壁等结构上有很大差别，因而对抗菌药物的敏感性不同。如大多数GP菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等敏感；而大多数GN菌对这几种抗生素不敏感，但对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感，故临床上可根据病原菌的革兰氏染色性，选择有效的药物进行治疗。 2、 抗酸染色法 有些细菌如结核杆菌、麻风杆菌等分枝杆菌，用一般染色法不易着色，必须使用强染色剂（如石炭酸复红）并采用加热和延长染色时间的方法才能使其着色。且一旦染上颜色后又不易被酸性酒精脱色。这种能够抵抗酸性酒精脱色的细菌，称为抗酸杆菌。应用这种原理进行染色的方法叫抗酸染色法。抗酸染色法常用的有萋—纳二氏染色法和潘本汉氏染色法。 ①染色的步骤： 直接涂片法 夹层杯液基集菌法： 细菌的染色和涂片观察 第一节? 不染色标本检查法 所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌的形态及运动状况的一种检查方法。这种检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主要用于观察细菌的动力。 一、不染色标本检查法的具体方法 1 、压滴法 2、悬滴法 3、毛细管法 第二节? 染色标本检查法 所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细菌进行染色，而后再检查其形态、大小、排列方式、染色反应以及特殊结构的一种检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。 ? 细菌染色的一般程序 细菌染色的基本程序是： 涂片 → 固定 → （媒染）→ 染色 → （脱色）→（复染） 1、 涂片制备： 随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。 2、 固定： 染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常不易使染料透入细胞内）。 固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目的时也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化高汞、重金属盐或氧化剂等进行固定。 3、 媒染： 媒染的目的是增加染料和被染物的亲和力。凡使染料固定于被染物；或引起细胞膜通透性改变的物质统称为媒染剂。常用的媒染剂有明矾、苦味酸、金属盐、碘等。也可用加热法媒染。媒染剂可用于固定之后，亦可含于固定液或染液中，也可在初染之后复染之前进行。 4、 染色： 随目的而选用适宜的染液。染色时，滴加染液以覆盖涂面为度，染色时间随方法而定。单染法只用一种染料如吕氏美兰、稀释石炭酸复红等；而多数染色法需用第二种染液进行复染。 5、 脱色： 脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目的是观察细菌与染料结合的稳定程度，故可作为鉴别染色之用。 凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负电荷，故可作碱性染料的脱色剂。 6、 复染： 已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成鲜明对比，所以复染也称为对比染色。复染液不宜太强，以免掩盖初染的颜色而失去对比作用。 常用染色法 细菌的常用染色法有：单染色法、复染色法、特殊结构染色法、负染色法以及荧光染色法等。 （一）、单染色法： 单染色法是指用一种染料进行染色的方法。如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种细菌均染成同一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小，对细菌的鉴别价值不大。 （二）、复染色法： 复染色法是用二种以上染料进行染色的方法。此法除显示细菌的形态、大小外，还有鉴别细菌种类的价值，因此也称鉴别染色法。常用的鉴别染色法有革兰氏染色法及抗酸染色法。 1、 革兰氏染色法（Gram’s Stain） 是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细菌学家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今已逾百年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法。 （1）、革兰氏染色的方法： 固定—→初染—→媒染—→脱色 （结晶紫或龙胆紫） （ 卢戈氏碘液） （95%酒精） —→复 染 （稀释复红） 固定 初染 媒染 脱色