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通过调控 Seed Fatty Acid Reducer 和 Transparent Testa 2 以提高十字花科植物种子含油量 油菜是世界上最重要的油料作物之一 , 然而其种子油脂合成的机制及其调控 网络仍不清楚。拟南芥作为理想的模式植物 , 与油菜同属十字花科植物。 本文的主要目的在于：揭示 5 个 GDSL型 SFAR(Seed Fatty Acid Reducer) 基因和 TT2(Transparent Testa2) 在拟南芥种子脂肪酸代谢以及种子萌发和幼苗 形态建成方面的功能； 赤霉素传导途径对拟南芥种子、 叶片脂肪酸代谢和叶片衰 老的影响以及与 SFAR在脂肪酸代谢方面的关系；研究外源赤霉素和多效唑以及 GDSL型 BnLIP2 对油菜种子脂肪酸积累的影响以及 BnLIP2 在种子萌发和幼苗形 态建成过程中的功能。本研究不仅为揭示油脂代谢的机制提供重要的理论依据 , 而且为油菜等油料作物的高含油量育种和转基因技术改良提供宝贵的信息和基 因资源。 主要研究结果如下： 1. GDSL 型 SFAR基因对拟南芥种子脂肪酸含量和组分 以及油体的影响。 5 个 GDSL型 SFAR基因的 T-DNA插入单突变体或双突变体种子 中脂肪酸含量较野生型明显增加 , 而它们的超表达转基因植株种子中的脂肪酸含 量明显减少。 结果表明 ,SFAR通过参与脂肪酸降解过程而使得种子脂肪酸积累量减少 , 同 , 他们在脂肪酸积累方面存在加和效应。 此外 ,SFARs基因还显著影响种子脂肪酸组分和种子油体大小 2. 赤霉素传导途径与 SFARs的关系。 加强赤霉素信号传导导致拟南芥成熟种子中的脂肪酸含量与组分表现出‘’ SFAR足迹”。同时 , 参与种子发育和储藏物质积累的重要转录因子、脂肪酸合成 代谢途径上的关键基因以及 5 个 GDSL型 SFAR基因在种子积累的关键时期均被显 著上调。 此外 , 拟南芥成熟种子中的油体与 SFAR基因超表达转基因植株种子的油体 表现型相似。该结果表明 , 赤霉素传导途径通过调控 DELLA蛋白下游的 SFAR基因 影响拟南芥种子脂肪酸的积累。 SFARs 基因对种子萌发和幼苗形态建成的影响。在含有6%葡萄糖的 MS 培养基上 SFARs基因超表达转基因植株种子的发芽率比野生型高很多 , 并且多数 幼苗能够长出真叶而完成形态建成。 另一方面 ,PEG6000处理 35S::SFAR4转基因幼苗在短时间内导致很多胁迫相 关基因产生表达差异。拟南芥超表达转基因植株种子中的‘’ SFAR足迹”可能 导致其具有较强的抗渗透胁迫能力。 赤霉素传导途径对拟南芥叶片衰老和脂肪酸代谢的影响。 在叶片衰老过程 DELLA突变体 (Q-DELLA/gal-3 和 gal-3) 的叶片颜色、叶片干重、叶绿素含量、可溶性糖、叶片脂肪酸含量和组分均发生明显改变。 DELLA蛋白显著调控 SAG12和 SAG29基因、参与脂肪酸β氧化途径的基因以及其他几种与叶片衰老相关的激素途径上的基因表达。因此 , 赤霉素传导途径有可能通过 DELLA蛋白与其他植物激素互作促进叶片衰老。 赤霉素传导途径对油菜种子脂肪酸含量的影响。 外源赤霉素 (500 μ M)显著增加浙双 72 和浙双 758 的单粒种子干重 , 却显著减少油菜种子脂肪酸含量。 这与拟南芥中的研究结果相吻合。在 500μM多效唑处理下 , 浙双 72 和浙双 758 单粒种子干重与对照相比也增加 , 种子脂肪酸含量减少。 这可能是因为高浓度的多效唑对油菜生长造成了胁迫 , 从而影响种子脂肪酸 的积累。 6. BnLIP2 对拟南芥种子脂肪酸含量以及种子萌发和幼苗形态建成的影 响。 在浙双 72 和浙双 758 油菜种子发育过程中 ,BnLIP2 的表达量不断下降。外 源赤霉素诱导 BnLIP2 基因的表达。 在拟南芥中超表达 BnLIP2 对种子脂肪酸积累无明显影响 , 但显著增强其在 种子萌发和幼苗形态建成过程中对非生物胁迫的抵抗力。结果表明 , 外源赤霉素 并不是通过 BnLIP2 降低油菜种子脂肪酸积累 , 而有可能通过其他 GDSL型酯酶 / 脂肪酶基因或其他途径影响油菜种子脂肪酸的积累。 TT2 基因对拟南芥种子脂肪酸积累和幼苗抗胁迫能力的影响及其分子机制。生理生化结果和分子数据显示 ,TT2 功能缺失导致成熟种子体积变小、重量减少、脂肪酸含量显著增加以及种子脂肪酸组分发生显著变化。 tt2 突变体种子脂肪酸含量增加主要归结于以下原因： 1) 种皮变轻使得种子 胚占种子的相对体积和重量增加； 2) 更多的乙酰辅酶 A 流向脂肪酸合成途径； 3)FUS3和脂肪酸合成途径上的关键基因被显著上调； 4) 总蛋白质和储藏蛋白质 含量降低。另一方面 ,tt