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猪 Mx1蛋白抗 PRRSV作用及其分子机制初探 猪繁殖与呼吸综合征（ Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是目前中国国内乃至全球范围养猪业中一种较为严重的病毒性 传染性疾病 , 主要以引起母猪的繁殖障碍症状和仔猪的呼吸道疾病为特征。该疾 病是由蓝耳病毒 （ PRRSV）引起 , 于 1987 年首次在北美被发现 , 随后便在世界范围 内迅速而广泛传播 , 给全球的养猪业造成了极为巨大的的经济损失。 然而目前该病并没有行之有效的科学的治疗手段 , 主要以预防为主。宿主细 胞的抗 PRRSV机制的研究能够为 PRRS的防控及新型疫苗的研发提供新的思路和 方法。 本实验室成员已做的蛋白质组学 iTRAQ技术研究结果表明 , 猪外周血单核树 突状细胞（ MoDCs）感染高致病性 PRRSV后 , 在较长一段时间内 , 猪 Mx1蛋白的表 达显著上调。那么 Mx1蛋白是否具有抗 PRRSV的功能 ?其机制又是什么 ?为此 , 我 主要进行了以下几个方面的研究 :1 、猪 Mx1蛋白的抗 PRRS病毒活性我构建了 Mx1 蛋白及其分段蛋白的质粒 , 通过 TCIDsub50/sub试验 , 我证明了猪 Mx1蛋白可 以大大降低 PRRSV的滴度 , 表明 Mx1蛋白具有显著的抑制 PRRSV增殖的活性 , 其 中 ,Mx1 蛋白的 G结构域发挥了主要的抗病毒作用。 绝对荧光定量试验结果进一步证明 ,Mx1 蛋白可以显著降低 PRRSVgRNA水平 , 其中 ,G 结构域发挥了主要作用。 2、Mx1蛋白的 G 结构域与 PRRSV的核衣壳蛋白 N的 C末端结构域互作为了探究 Mx1蛋白与 PRRSV的蛋白的相互关系 , 我构建了 PRRSV所有结构蛋白与非结构蛋白的表达载体。 通过 Renilla Luciferase Assay（RLA）试验 , 成功筛选到了与 Mx1互作的 N 蛋白 , 同时也筛选到与 N 蛋白互作的是 Mx1蛋白的 G结构域。随后我通过免疫共 沉淀试验（ Co-IP ）辅助证明了这些结果。 N蛋白进一步分段后 ,Co-IP 证明了 G结构域与 N蛋白的 C末端结构域（ NC） 互作。 3、Mx1蛋白的 G结构域与 N蛋白 C末端结构域共定位于细胞质我将 Mx1、 Mx1突变体、 G结构域的质粒分别与 PRRSV N蛋白、 N蛋白 N端（ NN）、 N 蛋白 C 端（ NC）、N蛋白 NLS突变体质粒共转染 HEK-293T细胞 , 通过间接免疫荧光试验 IFA）证明 ,Mx1 与 N蛋白、 G蛋白与 NC蛋白可以共定位于细胞质 , 表明 Mx1蛋 白可能主要在细胞质中发挥抗病毒作用。 综上所述 , 本研究首次初步揭示了猪 Mx1蛋白抑制 PRRSV增殖的分子机制 , 即猪 Mx1蛋白在细胞质中通过 G结构域与 N 蛋白的 C 端结构域互作 , 绑定到病毒 衣壳蛋白 N 上, 进而抑制了 PRRSV的增殖 , 降低病毒滴度。 本研究结果扩充了 Mx1 蛋白抗病毒分子机制的多样性 , 并为预防和控制 PRRSV感染提供了新的思路和方 法。