玉米茎节再生体系建立及农杆菌介导agpase基因转化玉米的研究.docxVIP

玉米茎节再生体系建立及农杆菌介导 AGPase基因转化玉米的研 究 玉米（ Zea mays L. ），一年生，禾本科植物，是世界上最重要的农作物之一， 被广泛用做饲料、 工业原料。玉米淀粉是玉米籽粒的主要成分， 我国玉米的淀粉 研究，相比于发达国家，在遗传育种、加工利用等方面都还有很长一段路要走， 而将基因工程与传统育种的方法相结合是提高玉米淀粉含量的重要途径之一。 在玉米遗传转化中， 建立良好的受体系统是实现基因转化的先决条件。 本实 验以 8 个玉米自交系的茎节为外植体，建立了茎节再生体系。 与愈伤组织再生体系相比， 该体系可以在较短的时间内再生成苗， 具有不受 基因型和季节限制等优点。利用农杆菌介导法将玉米 AGPase基因转入玉米自交 系郑 58 的茎节中，获得了转基因植株，为玉米遗传转化开辟了一条新途径。 主要研究内容和结果如下： 1. 成功构建了双价植物表达载体 pCAMBIA3301-ZmAGPS::pHorD-RP5::ZmAGPL。质粒的 T-DNA区含有 ZmAGPL和 ZmAGPS两个目的基因，分别由胚乳特异性启动子 RP5和 HorD驱动。 以玉米自交系郑 58 的茎节为外植体，从激素浓度、无菌苗和茎节大小等方面进行了相关实验， 建立了一套稳定的玉米茎节再生体系。 结果表明： 生根培养基中 NAA的浓度为 0.3-0.5mg Lsup-1/sup 、无菌苗大小为 4.5-5cm 时切取茎节且茎节上下部各保留 0.5cm 时，茎节的再生率最高。 对 8 个玉米骨干自交系的茎节进行再生培养，再生率均达到 92%以上。 3. 对 58 的茎节进行石蜡切片的组织学观察，观察到分生组织和叶原基。 农杆菌介导法将玉米 AGPase基因导入玉米茎节受体系统中，在双丙氨磷 浓度为 3mg Lsup-1/sup 的培养基上进行筛选。对筛选后得到的抗性植株进 PCR检测和 PCR-Southern 杂交验证，获得了转 ZmAGPL基因的 T0 代阳性植株 4 株， PCR阳性率为 6.06%。