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类风湿性关节炎的基因治疗研究进展 摘要：类风湿性关节炎（RheumatoidArthritis, RA）是一种以关节滑膜炎为 特征的慢性全身性自身免疫性疾病，其发病机制至今尚未完全明确。RA的传统 药物一般起效慢，副作用比较大，近年来兴起的生物治疗方法己经广泛的用于临 床治疗了，但主物药剂价格高昂，且由于其限制了免疫系统的功能，导致机体更 容易被其他病莓侵袭，也容易感染。而基因治疗则避免了这些缺点，从分子水平 针对发病机制进行治疗，选择性高，能准作用到靶基因，为RA的治疗开辟了新 的道路。冃前，在RA的基因治疗中使用的载体系统主要有病毒载体系统和非病 毒载体系统。 关键词：类风湿性关节炎；基因治疗 类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种累及全身多个关节的自身免 疫性疾病，病因及病理机制比较复杂，至今尚未完全明确。该病如不及时诊治， 可发展为关节僵直、畸形、致残而严重影响劳动力。近几年来，生物治疗RA取 得很大的进步，然而这种治疗较昂贵，不良反应大而且需要反复注射，受到很大 限制。基因治疗则可以避免这些缺点。其优点为靶向选择性高、不良反应小，为 RA的治疗带来了新的方向。 本文就近儿年基因技术在治疗RA上的进展作一综述。 病毒载体系统 病毒载体系统 病毒载体是指以病毒为基础的慕因载体，是对病毒慕因组进行操作和改造, 使之能携带外源基因和相关基因元件，并被包装成病毒颗粒，而构建的基因导入 系统。目前在RA的治疗中主要有下列几种类型病毒载体: 反转录病毒载体 反转录病毒载体 反转录病莓属于正链RNA病毒，是最先被改造且应用最为广泛（＞50%）的 基因治疗载体。其基因组大约为10kb,含有3个最重要的基因：即gag （编码核 心蛋白）、pol （编码反转录酶）和eiw （编码病毒外膜蛋白）。基因排列的顺序是 5?-gag-pol-env-3\两端存在长末端重复区（LTRS）用于介导病毒的整合，env 基因中含有病莓包装所必需的序列。反转录病毒载体具有转染率高，可稳定整合 表达、宿主范围广泛及对宿主的毒性小等优点，在RA的基因治疗中，以反转录 病毒作为载体已取得很好的治疗效果。用编码MT1-MMP反义RNA的重组反转 录病毒转染RA患者的滑膜成纤维细胞60d后进行定量PCR、Western blot和免 疫组化染色检测得MT1-MMP反义mRNA是对照组的15倍，其蛋白的水平大大 降低，关节软骨的损伤和炎症也有很大的减轻［巳其不足的是，逆转录病毒只能 转染处于分裂增殖期的细胞，其与受染细胞的整合具有随机性，有潜在的危险性, 因此，若要将其安全应用于人体，还需进一步改造。 腺病毒载体 腺病毒载体 腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒，其基因组长约36kb,含有早期转录 区（El、E2、E3、E4）和晚期转录区（LI、L2、L3、L4、L5）。E1基因位于基 因组的1.0?1.6基因图距单位(Mu),为病毒复制的必须区，缺失E1基因的腺病 毒为复制缺陷的腺病毒载体。E3区位于基因组78?86Mu,是病毒复制的非必须 区，可作为外源基因的插入区。腺病莓载体通常缺失E1和E2区域。作为基因 治疗的载体，腺病毒载体具有以下显著优点：(1)基因组大，可插入大片段的外 源基因(至多可达35kb)； (2)可高效地转染不同类型的人组织细胞(体外实验 转染效率通常接近100%)； (3)可转染菲分裂的细胞；(4)在细胞培养物中有 高滴度的重组病毒产量(10】4/L)； (5)进入细胞后并不整合到宿主细胞的基因 组中，仅瞬间表达，因而安全性较高，由于腺病毒载体具有上述优点，故在RA 的基因治疗中被广泛应用。将能表达凝血酶敏感素?1 (TSP-1)的腺病壽载体 (AdTSP-1)的鼠关节内注射胶原诱导的关节炎(CIA)模型⑵，与对照组相比 较，其CIA的严重程度降低，血管内皮生长因子(VEGF)生成量减少，TSP-1 和转化生长因子?E(TGF?0)的牛成量增加，滑膜肿胀得到抑制，CIA可得到很 大的改善。能表达IL-13的腺病毒载体在RA模型中降低促炎性细胞因子的主成, 足肿胀体积减少，骨损伤减弱，单核细胞、淋巴细胞和多形核细胞数量等关节炎 症的指标明显下降，炎症得到明显改善；而腺病毒由于其基因组复杂，难以构建 包装细胞系因而使之应用受到一定的限制。 1. 3疱疹病毒i 1型单纯疱疹病毒(HSV?1)属于人嗜神经病毒，可在神经元细胞内建立潜 伏转染。HSV?1可被改造成两类载体：一是扩增子(amplicon)载体，即仅把 HSV-1的复制起点和包装信号序列插入到细菌的质粒中。当其转染至包装细胞 后，用HSV?1辅助病毒超转染，便可获得含有扩增子的假病毒。另一类为重组 的HSV?1,即删除了与复制相关的非必需基因，以减少其对细