微囊藻毒素异源基因工程抗体构建设计与应用研究.pdfVIP

目 录 目 录 摘 要 I ABSTRACT III 主要英文缩写表VII 第一章 绪论1 1.0 引言 1 1.1 微囊藻毒素的产生2 1.1.1 微囊藻毒素产生的主要内在因素2 1.1.2 微囊藻毒素产生的主要外在因素3 1.2 微囊藻毒素的致毒机理及主要危害风险4 1.2.1 微囊藻毒素的致毒机理4 1.2.2 微囊藻毒素的危害风险5 1.3 微囊藻毒素检测方法的研究状况7 1.3.1 基因分子生物学检测法7 1.3.2 动物生物测定检测法8 1.3.3 仪器化学检测法8 1.3.4 蛋白磷酸酶抑制检测法9 1.3.5 抗体免疫分析检测法9 1.4 抗体及其发展与制备技术 11 1.4.1 多克隆抗体制备技术 13 1.4.2 单克隆抗体及其制备技术 14 1.4.3 基因工程抗体及其创新制备技术 15 1.5 噬菌体展示技术在基因工程抗体制备上的优势 17 1.6 选题的背景意义、研究内容以及课题总技术路线 19 1.6.1 选题的背景意义 19 1.6.2 选题的研究内容 19 1.6.3 选题的总技术路线20 第二章 MC-LR 驼源纳米抗体筛选与应用21 2.0 引言21 2.1 材料22 2.2 方法23 2.2.1 制备和评估MC-LR-KLH 和MC-LR-BSA 复合物23 2.2.2 扩增和评估M13K07 辅助噬菌体24 i 微囊藻毒素异源基因工程抗体构建设计与应用研究 2.2.3 扩增和评估驼源噬菌体展示纳米抗体库25 2.2.4 富集和评估MC-LR 噬菌体展示纳米抗体25 2.2.5 筛选和鉴定MC-LR 噬菌体展示纳米抗体26 2.2.6 阳性单菌落PCR 及其DNA 测序比对分析27 2.2.7 E. coli BL21 化转感受态细胞制备及效果分析28 2.2.8 MC-LR 纳米抗体基因克隆、可溶性表达及纯化29 2.2.9 以驼源VHH-NAbs 建立IC-ELISA 测定MC-LR 及其同系物31 2.2.10 以驼源VHH-NAbs 建立的IC-ELISAs 实用性评价31 2.3 结果与讨论32 2.3.1 MC-LR-KLH 和MC-LR-BSA 偶联复合物制备效果32 2.3.2 M13K07 辅助噬菌体扩增效果35 2.3.3 MC-LR 噬菌体展示纳米抗体富集效果36 2.3.4 MC-LR 噬菌体展示纳米抗体ELISA 检测效果37 2.3.5 阳性单菌落PCR 扩增及其氨基酸序列比对效果38 2.3.6 E. coli BL21 化转感受态细胞制备效果40 2.3.7 MC-LR 纳米抗体基因克隆、可溶性表达及纯化效果40 2.3.8 以驼源VHH-NAbs 建立IC-ELISAs 测定M