pPI C9K序列实用课件.docxVIP

载体基本信息 出品公司: Inｖitｒｏgeｎ 载体名称: pPＩＣ9K, pＰIC ９Ｋ 质粒类型: 毕赤酵母蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: AOX1 克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶 载体大小: 9２76　bp ５’ 测序引物及序列: 5′　AＯX1:５′-GAＣＴGGＴTＣCＡＡTTGAＣAＡＧC－3′;　alpｈa—Faｃtor—Ｆ: ５′-ＴＡCTＡTTGCCＡＧＣAＴTGCTＧC－3′ 3＇ 测序引物及序列: 3′ ＡOX1:5′-GCＡAATGGCATＴCＴGACＡTCC—3′ 载体标签: N—ａlpha ｆactor 载体抗性: 氨苄与卡那 筛选标记: HＩS４ 备注: 利用alpha分泌因子,分泌表达蛋白、 产品目录号: V1７５-2０ 稳定性: 稳定　Staｂｌe 组成型: 组成型 Ｃoｎｓｔituｔｉｖe 病毒／非病毒: 非病毒 载体质粒图谱与多克隆位点信息 载体简介 ｐPIC9K载体中存在卡那抗性基因,允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝,载体其余部分与pPIC9载体完全一样。pPIC9K载体能够使用得毕赤酵母宿主菌就是KM71与GS1１5。??pPＩＣ9K载体详细信息如下:??? pＰIC9载体大小9276 bp,就是融合表达载体。??? 载体构建过程中,可供使用得单一限制性内切酶位点为SnaB　I, EcoR I,　Avr II,　Not I.? 利用alpha因子分泌信号肽,分泌表达蛋白基因。?? 在载体构建过程中,您得基因必须保证与信号肽得起始密码子得读码框一致。?? 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选、??　为了将基因插入GＳ115或KM7１得ＡOX区, 使用SacＩ限制性内切酶线性化质粒(GＳ115中产生His+Mut+基因型,KＭ71中产生Hiｓ+　ＭutＳ基因型)??为了将基因插入GＳ1１5或KM71得His４区,　使用Sal　I或者Sｔu　Ｉ限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+　Mｕt＋基因型,KM71中产生His+ MutS基因型)?将基因插入ＧS１15得AOX1区域,需要使用Bgl II线性化质粒 (产生Ｈis+MｕｔS基因型)。 载体序列 LＯCUS 　 ｐPIC9K?9２76　bp　?DNA 　 ｃircuｌar SYＮ DEFIＮITION pPIＣ９K ACCESＳIOＮ 　 KEＹWＯRＤS 　　 SＯUＲCE　 　 ORＧAＮISM　 other sequences;　arｔifiｃial ｓｅquences; ｖｅctors。 COＭMENT Thiｓ createｄ by　Vｅctoｒ NＴI COＭＭENT 　 VＮTＡＵTHＯRNAME|ｂiofeｎｇ、ｃｏm｜ ＦEAＴＵＲES 　 Locatｉon/Quａｌiｆiｅｒs 　 　 sｏｕrce 　 　 　１、.９276 　 　 　　 　 /organiｓm=”pPIＣ９K＂ 　　 　 　 　　 　 ／mol_type=oｔher DＮA misc＿ｆｅaturｅ　　 1152、、1172 　 　 　 　 　 ／label=＂ａlpｈa＿fａｃｔoｒ_primｅｒ miｓc_fｅaｔurｅ　 ｃｏmplement(１3２７、.1347) 　 　 　 　 /labeｌ=3_AOX1_ｐｒｉｍeｒ” 　　 ＣＤS 　　 　 pleｍent(1９80、。4514) 　 　 　 /label=ＯRF frame　２ gｅne 　　 cｏmｐlement(492８.、57４3) 　 　　 　 /lａbｅl＝ＫａｎR2” 　 　　 　 　　 　 /gene=ＫaｎR２” 　 　　CDS 　 cｏｍplement(4９２8、。5743) 　 　　 　 　 　 　 　/lａbｅｌ＝＂ＯＲF ｆｒａme 3” 　 misc＿ｆeatｕｒe ｐlｅmeｎt(59０8。。592７) 　 　　 　 /label＝pBRrｅvBａm_prｉmｅr 　 CＤS　　 　　 　　cｏｍｐｌement(59０9、。６631) 　 　 　 　 　／label=”OＲF ｆramｅ 3” 　 　misｃ＿feaｔure ｃｏmplement(6９1３、、6９35)