免疫学技术的范畴与应用.ppt

可溶性抗原的制备与纯化 1 、处理与粉碎 2 、蛋白质分离 3 、单一组分提取 4 、抗原纯度鉴定 处理与粉碎 组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物 蛋白质分离 选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀 透析技术： 超滤技术： 单一组分提取 层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析 离心技术：差速离心 密度梯度离心 电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦 凝胶层析（分子筛） 离子交换层析 + + + — — — — — — — + + + + + + + + — — + + + — — + + 亲和层析 第一节 免疫学技术的范畴与应用 一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点 免疫学技术的范畴 1 、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定 2 、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定 免疫学技术的应用特点 1 、对象 ——“ 包罗万象” 2 、方法 ——“ 兼容并蓄” 第二节 有关免疫学基本概念 一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程 免疫原性 —— 可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性） 免疫反应性 —— 选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性） 抗原的概念与属性 免疫细胞的概念与分类 免疫细胞（ Immune cells ） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关 的细胞。 免疫活性细胞（ Immune competent cell ， ICC ） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、 分化并形成效应产物的淋巴细胞。 免疫细胞的类型 红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T 细胞 NK 细胞 免疫应答的概念与过程 免疫应答（ immune response ） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并 使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。 免疫应答的阶段 1 、抗原识别阶段（ antigen-recognizing phase ） 2 、淋巴细胞活化阶段（ lymphocyte-activating phase ） 3 、抗原清除阶段（ antigen-eliminating phase ） 第三节 抗原抗体反应的基本原理 一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素 抗原抗体反应的原理 1 、抗原抗体结合的作用力 2 、抗原抗体结合物析出原因 引起抗原抗体结合的作用力 1 、电荷引力（库仑引力） 2 、电子云引力（ Van der Waals 力） 3 、氢键结合力 4 、疏水作用力 抗原抗体结合物析出的原因 析出 + — — + 电解质 + — — + + — — + + — — + + — — + + — — + + — — + 抗原抗体反应的特点 1 、特异性 2 、可逆性 3 、适合比例性 特异性 抗原 A 抗原 C 抗原 B 特异性反应 交叉反应 无反应 可逆性 K （亲和常数） = Ag+Ab Ag Ab 适合比例性 抗体含量 抗原含量 前带 后带 等价带 网格学说 （ lattice theory ） 抗体过剩 抗原过剩 抗体抗体比例合适 抗原抗体反应的影响因素 1 、电解质 2 、酸碱度（ pH 值 6-8 ） 3 、温度（ 37-42 。 C ） 第四节 免疫学检测技术的评价 一、评价标准 二、特异性与敏感性的关系 评价标准 Specificity （特异） Sensitivity （敏感） Simplicity （简便） Safety （安全） Saving （节约） 特异性与敏感性的关系 特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低 第一节 抗原 / 免疫原制备的基本概念 一、抗原制备的目的 二、抗原的“纯度” 三、抗原制备的主要技术途径 抗原制备的目的 免疫原：激活 T 、 B 细胞 半抗原：检测相应抗体 抗原的“纯度” 免疫原：保留足够的可被 T 、 B 细胞 识别的抗原决定簇 半抗原：尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇 抗原制备的主要技术途径 天然抗原 —— 分离、纯化 半抗原 —— 人工合成、载体联接 抗原肽 —— 合成、基因工程制备 第二节 完全抗原 / 免疫原的制备方法 一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备 颗粒性抗原的制备 1 、采集、分离抗原 2 、无害化处理