遗传学：7 细菌的遗传分析.pptVIP

１ 细菌的重组作图的前提 (1)?两个基因紧密连锁 (2) 两个基因进入受体菌的先后顺序 例：已知lac和ade紧密连锁,在HfrX品系lac+比ade+先进入Ｆ- HfrX lac+ade+strs × F- lac-ade-strr 选择培养基 ? 加str且lac，无ade  Ｆ- ade+strr (lac-或lac+) 伊红美兰培养基 紫红色菌落ade+lac+ 粉红色菌落ade+lac- B: lac+ ade+ A:lac+ ade+ C: lac- ade+ F- lac+ ade+ 亲组合 52 ?F- lac- ade+ 重组合 15 2 计算重组体 重组值=重组菌落数/总菌落数 × 100% =(lac- ade+)/[(lac+ ade+ )+(lac- ade+)]×100% = 15/(52+15) × 100% ≈ 20% 已知中断杂交实验该两个基因相距1分钟, 重组作图与中断杂交作图的图距关系: 1分钟图距 ≈ 20% 重组值 3 E.coli染色体全长： 100分钟；含有：4.2×106bp 20 × 100 ≈ 2000 cM F′因子与性导 F′因子 F′因子是在Hfr菌中处于整合状态的F因子环出形成，并带有不同长度的染色体片断的环形DNA。 F因子在大肠杆菌基因组中有多处整合位点，不同的F′因子将带有不同的大肠杆菌基因。F′因子有转移能力，独立状态赋予受体菌部分二倍体。 F+与F-的杂交中，F因子的转移频率很高，但供受体细菌染色体的重组频率却很低，约为10-6。这种重组被称为低频重组(low frequency recombination，Lfr) 由于F′因子具有和F因子相同的转移能力，且带有供体菌染色体片断，引起与受体菌染色体发生高频率同源重组。 故含F′因子的菌和Hfr菌都能使F-菌发生高频重组(High frequence recombination, Hfr) 注意：F′因子转移细菌基因不同于Hfr菌 性导(sex-duction) F′因子将供体菌基因导入受体菌形成部分二倍体的过程。 F+ 菌株、Hfr菌株、F′菌株及F- 菌株之间的关系和区别。 比较F′因子和Hfr菌与F-杂交结果 1)Hfr:thr+ leu+ strs X F-:thr- leu- strr 结果筛选出F-: thr+ leu+ strr 重组子 2)F′:thr+ leu+ strs X F-:thr- leu- strr 结果筛选出F′: thr+ leu+ strr重组子 说明： F′因子引起的供体和受体重组均可筛选； Hfr引起的重组只能筛选到受体的类型， 重组后的供体线性DNA因不能复制丢失。 细菌的转化与作图 转化（transformation）：外源DNA直接进入受体菌并进行基因重组形成重组体的过程 转化子（transformant）：通过转化而形成的重组体 转化作图 转化的条件和机制: 供体细菌DNA片段、感受态细胞、受 体部位、蛋白参与；片段、进入、同化、复制与修复 转化基因间关系及其确定(共转化)：DNA低浓度正比关系 细菌的转化与转导作图 DNA浓度 下降比率 A转化率下降比率 B转化率下降比率 A与B共转化率下降比率 A与B 关系 1/2 1/2 1/2 1/2 连锁 1/2 1/2 1/2 1/4 不连锁 细菌的转化 转化子数(重组体数) 亲组合数+转化子数 例:供体 trp2+ his2+ tyr1+?trp2- his2- tyr1- P158 表6-5的重组值 trp2—his2的重组值=34% trp2—tyr1的重组值=40% his2—tyr1的重组值=13% 根据重组值作图： trp2 34 his2 13 tyr1 重组值= = (+ -)+(- +) (+ +)+(+ -)+(- +) 细菌转化基因间重组值的计算 转化（transformation）：外源DNA直接进入受体菌。 转导（transduction）：通过病毒/噬菌体外源DNA进入受体菌中。 普遍性转导（general~）：随机携带供体菌染色体 局限性转导（restricted~）：转导特定供体菌基因 共/并发转导(co-transdution)：两个基因同