酵母双杂交课件.pptVIP

2021/3/13 * Vidal 等提出的负选择系统用于研究相互作用的蛋白间的结构特征,筛选蛋白突变体,也可用于确定能够打破特异的蛋白相互作用的试剂。其原理在于BD-X/AD-Y激活的报告基因转录在特定的条件下是有毒性的,而相互作用的解除提供了可选择性。 表达URA3基因的酵母在缺乏5-氟乳清酸的培养基上能够正常生长。在含5-氟乳清酸的培养基上培养时,由于该酶的作用,将5-氟乳清酸转变成毒性复合物,使细胞停止生长或死亡。 负选择系统 2021/3/13 * 图8? 负选择系统 Fig.8? counterselectable reporters a．报告基因不转录,细胞生长; b．报告基因转录,细胞不生长或死亡（URA3在含5-氟乳清酸培养基上）??? a.? reporter gene doesnt transcript; b.? reporter gene transcript,and cell no growth or death 2021/3/13 * 双诱饵系统 2021/3/13 * 图9? 双诱饵系统 Fig.9? A two-bait system 2021/3/13 * 大规模进行双杂交筛选的方法 大规模进行双杂交筛选的方法,建立在酵母本身特性的基础上。酵母有不同的接合型,可以以单倍体和二倍体形式