发酵与酶工程汇总.pptVIP

第一章：工业微生物菌株 ? 微生物的特性及工业微生物的要求 ? 一些工业化产品生产菌种的特点 ? 自然界中有目的微生物分离的原则 ? 菌种选育、分子育种 ? 有些微生物能在厌氧的条件下生长 ? 有些微生物能利用简单的有机物、无机物满足自身的生长 ? 有些微生物能进行复杂的代谢 ? 有些微生物能利用较复杂的化合物 ? 有些微生物能在极端的环境下生长 一、微生物的特性 二、工业化菌种的要求 ? 能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物 ? 有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的可操 性要强 ? 遗传性能要相对稳定 ? 不易感染它种微生物或噬菌体 ? 生产特性要符合工艺要求 ? 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病菌 无关） 三、工业微生物的分离与筛选 工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然 界分离所需要的菌株；二是把分离到的野生型菌株进一步 纯化并进行代谢产物鉴别。 （ 1 ）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 （ 2 ）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中 进行分离筛选。 （ 3 ）从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋 白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶的产生菌等。 该类发酵制品经过长期的自然选择，具有悠久的历史，从 这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。 采样时要注意的问题 ? 根据土壤特点： 5-25cm; 5-10cm( 酵母 ); 10-30cm( 北方地区 ) ? 结合微生物的生理特点 ? 特殊环境下的采样 ? 标签：地点、时间、气候等 采样 ? 控制培养基的营养成分 富集的目的： 让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。 ? 控制培养条件 ? 抑制不需要的菌类 富集 富集培养主要根据微生物的碳、氮源、 pH 、温度、需氧等 生理因素加以控制。 分离 稀释涂布法： 划线分离法： 利用平皿的生化反应进行分离： 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑菌圈法 组织分离法： 单细胞或单孢子分离法： 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 采样（造纸厂） 80 ℃ 、 30 min 处理 文献 : 产生菌为中性芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌 及霉菌 0.0075% 曲利本蓝＋ 1%CMC （羧甲基纤维素）， pH10.5 培养 3 ～ 4 天，选择有凹陷圈的菌落 从 285 个土样中获得 62 株 26 株为组成型 36 株为诱导型 ↓ 目的 ? 提高生产能力 ? 提高产品质量 ? 开发新产品 ? 解决生产实际问题 ? 防止菌种退化 四、菌株选育、分子改造 方法 基因突变： 自然选育、诱变育种 基因重组： 杂交、原生质体融合、基因工程 基因的直接进化： 点突变、易错 PCR 、 DNA Shuffling 等 合成生物学 自然状态下，碱基对发生自然突变的机率为 10 -8 ～ 10 -9 自然突变有两种情况 ： 一种是我们生产上所不希望看到的，表现为菌株的衰退和 生产质量的下降，这种突变成为负突变 。 另一种是我们生产上希望看到的，对生产有利，这种突变 成为正突变。 （一）自然选育 自然选育在工业生产上的意义？ 极端微生物 ？ 自然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的 重要措施。 回复突变 ：高产菌株在传代的过程中，由于自然突变导致 高产性状的丢失，生产性能下降，这种情况我们称为回复 突变 问题： 高产菌株是正突变高，还是负突变高？ 自然选育操作步骤： 一般习惯上将自然选育称为菌种的分离纯化。 单细胞 ( 孢子 ) 悬液的制备 平板分离 挑选单菌落 ( 注意形态的观察 ) 发酵试验 （二）诱变育种 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变进行的筛选， 称为诱变育种 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂 诱变剂 物理：紫外线，快中子 化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍 航天育种：高真空，微重力，强辐射 2. 诱变剂处理过程中几个有关的问题 化学诱变剂使用过程的安全性 诱变剂量的选择 诱变剂的选择 出发菌株的选择 1. 诱变剂的