水稻纹枯病遗传的丰富多样性的研究进展.pptVIP

1. 限制性片段长度多态性 RFLP:Restriction fragment length polymorphism 2. 随机扩增多态性 RAPD:Randomly amplified polymorphic DNA 3. 扩增片段长度多态性 AFLP:Amplified fragment length polymorphisms 4. 简单序列重复间区 ISSR:Inter-simple sequence repeats 常用的DNA分子标记方法 常用的DNA分子标记方法 1. 限制性片段长度多态性(RFLP) Jabaji-Hare（1994）等首先采用核内核糖体DNA（rDNA）对丝核菌融合群体进行限制性片段长度多态性RFLP分析，虽然两个实验都发现了每个融合群都有一个或多个特征谱带，但在同一融合群内的特征谱带数目不一致。 Rosewich（1999）以7个单拷贝探针与美国德克萨斯州的6个稻米产区的182个纹枯病菌分离物进行RFLP分析，结果表明，6个地区的立枯丝核菌AG1-IA融合群均表现出多态性。 Vilgalys（1990）等的实验则指出由于AG1和AG2融合群的各亚群因表现相当大的遗传变异性，难以按RFLP带型划分。 RFLP法纹枯病菌遗传多样性国内外研究进展 RFLP Vilgalys R, Gonzalez D. Ribosomal DNA Restriction fragment length polymorphisms in Rhizoctonia solani[J]. Molecular Plant Pathology. 1990, 80(2): 151-158. PCR-RFLP Matsumoto M, Furuya N, Takanami Y, et al. RFLP analysis of the PCR-amplified 28S rDNA in Rhizoctonia[J]. Mycoscience. 1996(2): 351-356. 常用的DNA分子标记方法 2. 随机扩增多态性(RAPD) 原理：它是利用随机引物（一般为8-10bp）通过PCR反应非定点扩增DNA片段，然后用凝胶电泳分析扩增产物DNA片段的多态性。RAPD所使用的引物各不相同，但对任一特定引物，它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点，一旦基因组在这些区域发生DAN片段插人、缺失或碱基突变，就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化，从而导致扩增产物数量和大小发生改变，表现出多态性。 RAPD法纹枯病菌遗传多样性国内外研究进展 Duncan（1993）等采用RAPD分子标记技术，对来自澳大利业不同融合群(AG) 菌株进行遗传多样性分析，发现生成的指纹图谱能将所有的AG群区分开，但不同地理来源的菌株之间则无区别规律，这表明RAPD-PCR是可用于丝核菌融合群间区分的。 周而勋（2002）等对来自我国南方6个省(区)，72个水稻纹枯病菌菌株进行了RAPD聚类分析，结果表明，供试菌株存在丰富的遗传多样性，DNA条带的多态性与地理来源呈现明显的相关性。 易润华（2002）等采用RAPD分子标记技术分析了来自广东省7个县市48个水稻纹枯病菌菌株的遗传多样性，也得到了相类似的结论。 于金凤（2003）等利用RAPD对来自云南省不同地理环境的立枯丝核菌第一融合群(AG-1)的13个菌株进行遗传分化关系的研究，结果表明受试的13个菌株具明显的遗传分化。 RAPD Jeon Y, Wan-Gyu K, Dae-Ho K, et al. Taxonomic Position of Korean Isolates of Rhizoctonia solani Based on RAPD and ITS Sequencing of Ribosomal DNA[J]. The Plant Pathology Journal. 2010, 26(1): 83-89. 常用的DNA分子标记方法 原理：将DNA用可产生粘性末端的限制性内切酶消化产生大小不同的酶切片段，与含有共同粘性末端的人工接头连接，作为进一步扩增的模板。 3. 扩增片段长度多态性（AFLP） AFLP法纹枯病菌遗传多样性国内外研究进展 据报道水稻AFLP标记多态性较高，其基因组分布又较随机(Mackill等,1996;Maheswaran等1997;Zhu等,1998)。 短短几年内，已应用于水稻遗传变异性分析、框架图谱构建和基因定位等各个领域(Mackill等,1996;Maheswaran等,1997;Nandi等,1997;Tan等,1998; Zhu等,1998)。 范文艳等（2008）对黑龙江13个水稻