HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量 - 副本.docx

HPLC法测定复方双花颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯 的含量 【摘要】目的：建立 HPLC法测定复方双花颗粒中穿 心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法：色谱柱为 Welch -C18 柱（ 250mm × 4.6mm ，5μ m），流动相为甲醇 -水（ 52∶ 48），流速为 1.0ml/min ，检测波长： 穿心莲内酯为 225nm ，脱水穿心莲内酯为 254nm 。结果：穿心莲内酯在 2.55～ 51μ g 范围内线性关系良好， r=0.9999 ；脱水穿心莲内酯在 2.662～ 53.24μ g 范围内线性关系良好， r=0.9999 。穿心莲内酯平均 回收率分别为 97.9%，RSD=1.16%；脱水穿心莲内酯平均回收 率 100.13%、RSD= 1.86%。结论： 此法重复性好、 灵敏度高、定量准确，可作为该复方双花颗粒质量控制指标之一。 【关键词】复方双花颗粒；穿心莲内酯、脱水穿心莲内 酯； HPLC 【中图分类号】 R284.1【文献标志码】 A【文章编号】 1007-8517（ 2016） 09-0030-02 复方双花颗粒主要由金银花，板蓝根，连翘和穿心莲四 味药组成，具有清热解毒，利咽消肿的功效。其中，穿心莲 具有清热解毒、凉血、消肿功效 [1] ，主要有效成分为穿心莲 内酯、脱水穿心莲内酯等二萜内酯类成分。 2010 年版《中国 药典》一部“穿心莲”药材以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯 的总量作为质量控制指标。研究复方双花颗粒中穿心莲内酯 和脱水穿心莲内酯两者总含量的检测方法，为其质量控制提 供实验基础。 仪器与材料 1.1 仪器岛津 LC-2010CHT高效液相色谱仪（ SPD-M20A 检测器， LC-Solution 色谱工作站）； Waters 2695 型高效液相色谱仪（Waters 2487 检测器，Waters -Solution 色谱工作站）；BSA224S型电子分析天平； Sartorius CPA225D电子分析天平； 数显恒温水浴锅。 1.2 材料穿心莲内酯 （批号： 110854-200306 ）、脱水穿心 莲内酯（批号： 110797-200307 ）购于中国药品生物制品检定 研究院； 复方双花颗粒 （批号： 141201、141202、111102、 111101）。 甲醇为色谱纯 （美国 TEDIA公司）；水为超纯水； 其他所用试剂均为分析纯。 方法和结果 2.1 色谱条件色谱柱： Welch-C18 柱（ 250×4.6mm ，5μ m）；流动相：甲醇 -水（ 52∶ 48）；流速： 1.0ml/min ，检测波 长[2] ： 穿心莲内酯为 225nm ，脱水穿心莲内酯为 254nm ； 柱温： 25℃；进样量： 20μ l。理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于 3000，脱水穿心莲内酯峰计不低于 2500。 2.2 供试品溶液的制备取装量差异下本品研细， 取约 1.0g， 精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇 25ml，称定重量， 90℃ 水浴加热回流 30min ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10ml ，加于中性氧化 铝柱（ 200～ 300 目， 5g，内径为 1.5cm）上，用甲醇 30ml 洗脱，收集洗脱液，置于 50ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，即得。 2.3 线性关系考察精密称取穿心莲内酯对照品适量加甲 醇超声溶解，制成每 1ml 含 2.55、 5.1、 10.2、 12.75、 25.5、 51μ g 的系列标准溶液；另精密称取脱水穿心莲内酯对照品 适量加甲醇超声溶解， 制成每 1ml 含 2.66、5.32、10.64、13.31、 26.62、53.24μg 的系列标准溶液。 分别精密吸取上述系列标 准溶液 20μ l，注入液相色谱仪， 以对照品的浓度为横坐标， 测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得穿心莲内酯回归 方程： Y=43662X+1753.3， r=0.9999，线性范围为 2.55～ 51μ g；脱水穿心莲内酯回归方程： Y=28283X-2757.8， r=0.9999 ， 线性范围为 2.66～53.24μ g。 2.4 精密度试验精密吸取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯 对照品溶液进样 6 次，进样 20μ l，测定穿心莲内酯和脱水 穿心莲内酯峰面积，计算其 RSD值，分别为 0.2%、0.3%，表 明仪器精密度良好。 2.5 重复性试验取批号为 141201 供试品 6 份，平行制成 供试品溶液，测得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总含量为 1.41 mg/g ，RSD为 1.50%，表明本方法重复性良好。 2.6 回收率试验取同一批已知含量（批号： 141201，穿 心莲内酯含量为