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本章的主要内容 一. 氨基酸 二. 肽的定义与形成 三. 蛋白质的一级结构 四. 蛋白质的高级结构(重点) 五. 蛋白质结构与功能(重点) 六. 蛋白质的分离、纯化和表征 一、蛋白质分类 按分子组成分: 简单蛋白(单纯蛋白)主要按溶解性分类 结合蛋白(缀合蛋白)主要按辅助成分种类分类 按功能分: 功能蛋白(种类最多)按所具有的功能分类 结构蛋白主要为物质组成成分 蛋白质分类 按形状分: 球状蛋白立体像球状或椭圆形 纤维状蛋白长条形 膜蛋白参与细胞膜组成的蛋白 二、氨基酸 是组成蛋白质分子的基本单位。 即蛋白质分子主要由一个个氨基酸(残基)构建而成。 组成蛋白质的20种氨基酸 氨基酸符号三字符和一字符 Pro,Gly,Gln,Asn Ala, Leu, Ser P G Q N A L S (一)氨基酸分子结构特点 (二)氨基酸的分类 氨基酸的分类 2. 按R基团的极性性质可分为4类: 在pH7时 (表2—2,P22 请写出三字符和一字符) 1)非极性R基氨基酸:8个 2)不带电荷的极性R基氨基酸:7个 3)带正电荷的R基氨基酸:3个 4)带负电荷的R基氨基酸:2个 氨基酸的分类 3. 氨基酸R基团化学性质分析 1)极性的产生 2)电荷的产生 氨基酸的分类 稀有蛋白质氨基酸由正常组成蛋白质的氨基酸经修饰而形成的特殊氨基酸,也参与组成蛋白质分子,但少见。 非蛋白质氨基酸与“氨基酸库” 不参与组成蛋白质分子的氨基酸种类还有许多,有些氨基酸相当有用,但有些氨基酸有毒等。 一般在植物体中存在有一个“氨基酸库”,使体内代谢相对稳定。 (三)氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 两性解离性质 氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 随pH的变化氨基酸的解离状态 氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 等电点及其计算表达 等电点使氨基酸达到所带正负电荷相等时的溶液的pH值。用pI表示。 pI = 1/2(pK1+pK2) K基团解离常数。 pK与pH相当。 有K1、K2、K3时只用靠近的二个数值(也有例外) 其实,各氨基酸的K与pI都已求出,见P22。 氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 处在pI时氨基酸的特性及其利用 一般溶解度为最小沉淀与分离 电泳带电物质的分离 氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 氨基酸正负离子的判断 当溶液的pH大于pI时,该氨基酸带负电。当溶液的pH小于pI时,该氨基酸带正电。 试问: 当一氨基酸溶于pH为7.0的水中,测出该溶液的pH为6.0,问该氨基酸的pI大于6还是等于6或小于6?(带负,小于6) 氨基酸的两性解离和等电点(酸碱化学) 虽然氨基酸具有酸碱性,但不能直接用酸或碱进行滴定测含量。因为氨基酸是弱酸或弱碱的两性解离分子。 (四)氨基酸的化学反应 1. 由α-氨基参加的反应 与亚硝酸反应。但此反应有时并不是α-氨基的专一反应。 α-氨基的酰基化 氨基酸的酰化试剂有许多,如: 叔丁氧甲酰氯、对甲苯磺酰氯、丹磺酰氯等。这些物质在蛋白质化学修饰中起重要作用。 氨基酸的化学反应 α-氨基的烃基化氨基的一个H原子被烃基取代。 N端氨基酸残基的鉴定:N端有游离氨基,可发生烃基化反应。形成的不同氨基酸复合物通过层析可鉴定。 形成Schiff’s 碱 脱氨基反应形成酮酸 氨基酸的化学反应 2. 由α-羧基参加的反应 具有酸(COOH)的性质成盐、成酯、成酰胺、脱羧等。 氨基酸的化学反应 3. 二个重要的反应: 与茚三酮反应 所有氨基酸都能与茚三酮反应形成有色物质,脯氨酸与羟脯氨酸(亚氨基酸)形成的是亮黄色物质,其余所有氨基酸形成的是紫色物质。 成肽反应 一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基缩合脱水形成肽键。一般由酶来催化起反应。这是蛋白质分子形成的过程。 氨基酸的化学反应 (氨基酸的连接) 氨基酸的化学反应 4. R基团参加的反应 R基团种类众多,所起的反应也有各种类型,具体的反应由R基团所决定。 正因为R基团众多,用特定的化学试剂(化学修饰剂)可与这些R基团发生反应使蛋白质分子结构发生一定的变化,从而改变蛋白质的性质或功能(化学修饰作用)。 (五) 氨基酸的光学活性和光谱性质 1.旋光性由分子结构中不对称C原子引起的使平面偏振光的偏振面发生旋转的性质。 氨基酸的光学活性和光谱性质 蛋白质分子结构(氨基酸状态)发生变化,旋光性也发生变化(大小、方向),所以通过旋光光谱的测定可知蛋白质结构发生了变化,再测定其与功能变化的关系,就可知道结构如何影响功能了。 氨基酸的光学活性和光谱性质 2 . 光吸收光谱
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