第十章--血脂及血浆脂蛋白检验.pptVIP

2021/3/14 * 第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 目前临床上开展的血脂测定项目包括TC、TG、HDL及其亚类胆固醇、LDL-C、Lp（a）以及部分载脂蛋白如ApoAI、ApoB等。其中TC、TG、HDL-C、LDL-C测定是血脂测定的四个基本指标。血浆4℃冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可初步估计各种脂蛋白的变化状况。血浆脂蛋白电泳结合TC、TG水平有助于高脂血症分型。 概况: 2021/3/14 * 血脂测定标准化: 血脂分析前变异来源于: ①生物因素,如年龄、性别、种族等因素的个体差异。 ②生活方式,包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。 ③临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。 ④血标本采集与处理方面 准确测定应从分析前的准备开始,包括受试者的准备,标本 采集,合格的试剂、校准物的选用,检测方法选择。 方法学上应该采用美国疾病控制中心（CDC）或中华医学会检验分会推荐的操作方法。 2021/3/14 * 一、血清（浆）静置试验 将患者空腹12h后采集静脉血分离出血清置4℃冰箱中过夜,然后观察其分层现象及清澈度。 空腹血清混浊,表示TG升高,可放在4℃冰箱过夜后进一步观察,如果上层出现奶油样且下层清澈,表明CM升高,VLDL正常,可能为I型高脂血症。如果上层出现奶油样且下层混浊,表明CM及VLDL均升高,可能是V型。空腹血清混浊,4℃冰箱中过夜后仍为均匀混浊,表明VLDL升高,此时应进一步测定TC, TC升高者可能是III或IIb型而TC正常者则可能为Ⅳ型。IIa型高脂血症血清也清澈透明。 正常空腹血清应清澈透明。 2021/3/14 * 二、血清（浆）总胆固醇测定 化学法 酶法 2021/3/14 * （一）化学测定法 化学测定法通常需抽提纯化。显色剂主要有两类: ①醋酸-醋酐-硫酸 ②高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂,干扰因素多,准确 测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操 作较繁,不适于分析大批量标本,且不适于自动分析。 特点: 2021/3/14 * 1．Liberman-Burchard反应 1885年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色,1890年Burchard用此反应测定胆固醇称为L-B反应。 1953年Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇,称为Zak反应。 2．Zak反应 2021/3/14 * (二)酶测定法 特点: 常规测定中现已广泛应用酶法,酶法具有特异性好,精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求,既可以手工操作,也适合自动分析,但酶法测定中出现了不同程度的基质效应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用,其缺点是价格高,精密度差。胆固醇的酶测定法始于70年代。由于操作简便,试剂无腐蚀性,特别适用于自动生化分析,目前已成为测定胆固醇的主要方法。 2021/3/14 * CEH-COD-PAP法 原理: CE＋H2O FC＋FFA FC＋O2 △4-胆甾烯酮＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 醌亚胺＋H2O 胆固醇酶测定法的试剂中,除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外,还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性,表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来 2021/3/14 * 评价: 主要缺点是: 优点:本法灵敏度高、准确度高、精密度好,线性范围宽。 ①某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机 溶剂配制的溶液作为TC分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准, 此校准液（品）相当于三级标准。 ②表面活性剂,如吐温-40可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇6000 可使结果提高1％～2％; ③本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。 2021/3/14 * 【参考值】 血清总胆固醇合适范围: ≤5.20mmol/L (200mg/dl), 边缘升高:5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dl), 升高:≥5.72mmol/L (220mg/dl)。 2021/3/14 * 影响TC水平的因素 ①年龄与性别; ②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高; ③遗传因素; ④其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外,不能作为其它任何疾病的诊断指标,对于动脉粥样硬化和冠心病而言,TC是一个明确的危险因子,与