抗原抗体反应.pptVIP

2021/3/17 * ICA 双抗体夹心法测抗原 2021/3/17 * ICA 间接法测抗体 2021/3/17 * ICA 结果观察 阳性 阴性 无效 2021/3/17 * 半定量测定 IFA 肌红蛋白 双孔法 S:测定孔 C:定量质控 100μg/L IFA 微量白蛋白 单孔法 T:测定孔 C1:定量质控 30 mg/L C2:定量质控 200 mg/L 结果判定:30（-）、 30~100（+）、 100~200（++）、 200 （+++）mg/L ICA 甲胎蛋白（AFP） 参考值:30 μg/L 肝癌诊断值:400 μg/L 结果判定:30（-）、 30~200（+）、 200~400（++）、 400 （+++）μg/L S C 测 定 线 对 照 线 T C2 C1 2021/3/17 * IFA与ICA的比较 IFA ICA 试剂形式 渗滤装置及附加试剂 试剂条 试剂保存 4~8℃ 6个月 室温一年 操作步骤 3~5 1 观察时间 3 min 3~20 min 阳性反应颜色浓度 操作结束颜色不变 颜色逐渐加深 2021/3/17 * Biotin-Avidin/Streptavidin System Biotin（维生素H）分子为双环状结构,咪唑酮环与亲和素结合,噻吩环上的戊酸侧连与抗体等蛋白分子结合。 2021/3/17 * Avidin（抗生物素蛋白or卵白素）:从卵清蛋白中提取,有4个相同亚基组成,能结合4分子biotin。 Streptavidin:由链霉菌分泌产生的一种蛋白质产物,有4条相同的肽连组成,能结合4分子biotin。 2021/3/17 * 展望 1、标记技术的应用提高抗原/抗体检测的灵敏度,尤其对小分子抗原（药物、激素） 2、随着标记免疫分析的发展,自动化检测分析手段随之改进,达到规范、灵敏、精确、批量及快速的目标。 3、推动交叉学科的协作与发展。 2021/3/17 * 谢 谢 2021/3/17 * 间接ELISA法包被抗原工作浓度的选择 各类血清 包被抗原稀释度 1:100 1:200 1:400 1:800 1:160 强阳性 1.20 1.04 0.84 0.68 0.42 弱阳性 0.64 0.41 0.30 0.22 0.19 阴性 0.23 0.13 0.08 0.66 0.05 稀释液 0.09 0.02 0.02 0.02 0.04 选择标准:强阳性参考血清A值为0.8左右,阴性参考血清A值0.1 2021/3/17 * 酶免疫测定的酶结合物制备 *酶结合物（conjugate）或称酶标抗体或抗原。一般是通过化学交联(耦联)或免疫学反应而获得。 适宜标记用酶的要求: ①酶活性～ ②具共价交联能力～ ③催化底物产有色信号并易于检测～ ④自身稳定,不易受干扰～ 2021/3/17 * 免疫测定技术常用的酶及其底物(substrate) 酶 底物 显色反应 测定波长 辣根过氧化物酶 邻苯二胺 橘红色 492 四甲基联苯胺 黄色 460 氨基水杨酸 棕色 449 邻联苯甲胺 兰色 425 2,2-连胺基-2（3-乙基- 并噻唑啉磺酸-6）铵盐 蓝绿色 642 碱性磷酸酶 4-硝基酚磷酸盐（PNP） 黄色 400 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 红色 500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖 黄色 405