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蛋白质复性方法及其注意事项 蛋白前期准备 (1)查阅H标蛋口相关文献，了解其等电点，标签等注意点。 (2 )如果U标蛋口易降解，可在纯化时加l-2mMDTT,全程低温，及时处理. (3 )透析Buffer得选择可参考文献。 蛋白复性 包涵体：在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊得生物大分子，它们 致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性得结构称 为包涵体(In cl u si on Bod i es, IB)。 在E、c。中累积得重组蛋白会迅速地以包涵体形式被沉淀出来，这些包 涵体蛋白就是丧失生物活性得不可溶得错误折叠蛋白得聚集体. 包涵体得处理一般包括这么儿步:包涵体得洗涤、溶解、纯化及复性。 如果过表达蛋白在包涵体中■那么通常有两个选择可以考虑：(1)退一步，优化 表达条件；(2)接受包涵体并采取策略来将蛋口溶解以及复性.这里主要考虑笫二 种方案。 包涵体得洗涤 破碎细胞都会使细胞内蛋口质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物 降解，导致天然物质量得减少，加入蛋口酶抑制剂等，还可通过选择pH、温度或 离子强度等，使这些条件都要适合于目得物质得提取。 洗涤 Buf f e r :50mM T r i s -H C I (pH8 0) , 2mM EDTA, 2mM D TT, 1 5 0 mM NaCl, 1% Tri t on X一1 0 0, Img