血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定.docxVIP

实训二 血清Y—球蛋白得分离纯化与鉴定 目得要求 了解蛋白质分离提纯得总体思路. 2?掌握盐析法、分子筛层析法、离子交换层析等实验原理及操作技术. 实验原理 血淸中蛋白质按电泳法一般可分为五类:淸蛋白、a I-球蛋白、:一球蛋白、B-球蛋 白与Y—球蛋白，其中丫-球蛋白含量约占1 6 %, 100ml lflL；W中约含1。2g左右. 首先利用淸蛋白与球蛋白在高浓度中性盐溶液中（常用硫酸钱）溶解度得差异而进行 沉淀分离,此为盐析法。半饱与硫酸彼溶液可使球蛋白沉淀析出，淸蛋白则仍溶解在溶液中， 经离心分离，沉淀部分即为含有Y -球蛋白得粗制品。 用盐析法分离而得得蛋白质中含有大量得中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此首 先必须去除?常用得方法有透析法、凝胶层析法等?本实验釆用凝胶层析法，其目得就是利用 蛋白质与无机盐类之间分子量得差异。当溶液通过Se p屆d exG-—25凝胶柱时，溶液中分 子直径大得蛋白质不能进入凝胶颗粒得网孔，而分子直径小得无机盐能进入凝胶颗粒得网孔 之中。因此在洗脱过程中.小分子得盐会被阻滞而后洗脱出来，从而可达到去盐得目得。 脱盐后得蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们等电点得不同可进行分离。? -球蛋 白、B-球蛋白得PI〈6、0； Y—球蛋白得PI为7、2左右。因此在PH6、3得缓冲溶液 中，各类球蛋白所带电荷不同。经DEAE（二乙基氨基乙基）纤维素阴离