甲型流感病毒实验室检测技术方案.docxVIP

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 甲型 H1N1 流感病毒实验室检测技术方案 (试行 ) 本方案旨在为全国流感监测网络实验室提供甲型 H1N1 流感病 毒实验室检测技术方案 , 不用作商业活动或赢利目的。 一、 标本的采集种类和要求 1、 推荐采集的呼吸道标本种类 疾病发病后应尽快采集如下标本 : 鼻拭子、 咽拭子、 鼻腔吸 取物、 鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本 应置于无菌病毒采样液 , 并立即用冰块或冰排保存或置于 4 ℃ ( 冰箱 ) , 并马上送至实验室。 ( 临床样品采集人员及实验室检测人 员的感染控制指导请见相关文件。 ) 采样同时填写疑似人感染甲型 H1N1 感染病例标本采样单。 ( 附表 1) 2、 拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子 ( 例如 , 聚酯纤维 ) , 用铝或塑料做柄。 不推荐棉拭子和木柄。 标本采集管应包含 3 毫升病毒采样液 ( 含有蛋白质稳定剂 , 阻止细菌和真菌生长的抗生素 , 缓冲液 ) 3、 临床标本储存要求 保存在 4℃ ( 不能超过 4 天 ) 或者 -70℃或 -70℃以下。 有条件的实验室均应保存在 -70℃或 -70℃以下。不应保存在 -20℃。 4、 标本的分装处理 标本送至实验室后 , 立即进行处理 , 避免重复冻融。将原始标本分为三份 , 一份用于核酸检测 , 一份用于病毒分离 , 一份保存待复核。 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 5、 标本的运输 疑似人感染甲型  H1N1  感染病例列为  A 类,  用  UN2814  包装运 输。填写疑似人感染甲型  H1N1  感染病例标本送检单  (  附表  2)  。 二、 核酸检测 基于 PCR 原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法 , 在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。 1、基于 real-time RT-PCR 的方法检测新的甲型 H1N1 流感病毒 (  引物和探针序列为美国  CDC  设计 ) : 4 月  29 日  WHO  网站上公布了美国  CDC  设计的针对此次甲型 H1N1 流感病毒的 real-time RT-PCR 引物和探针 , 此实验用于检测疑 似甲型 H1N1 流感病例的呼吸道样本 , 因此 , 用此 real-time RT-PCR 的方法 , 建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和 H5N1 禽流感病毒。 real-time RT-PCR 方法参见附件 3( 中文翻译版 ) , 附件 4( 英文原版 ) 。 2、基于 RT-PCR的方法检测新的甲型 H1N1 流感病毒 ( 引物序列 为国家流感中心设计 ) : 当前国家流感中心设计了 RT-PCR 方法检测新的甲型 H1N1 流 感病毒。 RT-PCR 的方法参见附件 5。 三、 病毒分离鉴定 可采用鸡胚和 /或 MDCK 细胞进行流感病毒分离。具备相应条 件的网络实验室在收到标本后 24h 内进行病毒接种。 具体方法参见 附件 6 和 7。 四、 适用于实验室工作人员的甲型 H1N1 流感病毒生物安全 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 ( 一) 实验室级别及个人防护 1、 对采集自属于感染甲型 H1N1 流感病毒疑似病例的患者的 临床标本进行的诊断性实验工作 , 在 BSL-2 实验室内进行。 所有样本操作均应在生物安全柜 ( BSC) 内进行。遵循生物安全三级个人防护。 2、 对采集自属于感染甲型 H1N1 流感病毒疑似病例的患者的 临床标本进行的病毒分离培养工作 , 应在 BSL-3 实验室内进行 , 并 遵循生物安全三级个人防护。 ( 二) 健康监测 1、 所有人员均应自测发热及其它症状。 2、 感染甲型 H1N1 流感病毒的症状包括咳嗽、 喉咙痛、 呕 吐、 腹泻、 头痛、 流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适 , 应立即向上级 报告。 3、 如有人员在无防护情况下暴露于甲型 H1N1 流感确诊病例 的临床标本或活病毒 , 应考虑在暴露后的 7 天时间里使用奥司她韦 或扎那米韦进行抗病毒药物预防。 五、 附表和附件 附表  1  疑似人感染甲型  H1N1  感染病例标本采样单 附表  2  疑似人感染甲型  H1N1  感染病例标本送检单 附件  3:  real-time RT-PCR  方法检测甲型  H1N1  流感操作规程 ( )(  中文 ) 附件  4:  real-time RT-PCR  方法检测甲型  H1N1  流感操作规程 ( )( 英文 ) 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联