第三章-生物制药基本技术.pptVIP

2021/3/26 * 优点:设备要求不高,操作简便,适用范围广,特异性强,分离速度快,效果好,条件温和。 缺点:通用性较差,洗脱条件要求苛刻。 几种常用的载体: （1）纤维素:自然界中数量最大的大分子生物材料,取材十分方便。但由于其结构紧密、均一性差,不利于大分子的渗入。活化后常带有电荷,非特异性吸附较强,加上空间位阻等原因,其应用不如凝胶载体广泛。目前主要用于分离与核酸有关的物质。如用寡聚脱氧胸腺核苷酸纤维素作固定相分离细胞提取液中的mRNA. 市售商品有:无定型微纤维、微晶纤维素、珠状纤维素。 2021/3/26 * （2）琼脂糖凝胶:用于亲和层析的主要为交联珠状凝胶。其琼脂糖的质量浓度为20g/L(2%)、40g/L(4%)、60g/L(6%)几种,相应的商品称为Sepharose 2B、4B、6B(Pharmacia)和Ultrogels A-2,A-4,A-6)。这类载体能使吸附物质保持活性,能迅速活化并接上各种功能基团,结构疏松孔径大,流速快。 （3）葡聚糖凝胶:与琼脂糖凝胶相比孔径太小,特别是经配基偶联后,凝胶膨胀度会进一步边小,所以应用受到限制。 （4）聚丙烯酰胺凝胶:碳—碳骨架,有丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,具有网状三维空间结构。商品名为Biogel P。 注意避免接触强氧化剂,配基偶联后会使它的网格缩小,在一定程度上限制了它的应用。 2021/3/26 * （5）多孔玻璃珠:化学和物理稳定性好,机械强度高,不但能抵御酶及微生物的作用,还能耐受高温灭菌和较剧烈的反应条件。 缺点:亲水性不强,对蛋白质尤其是碱性蛋白质有非特异性吸附,而且可供连接的化学活性基团也少。 改良方法:为了克服其缺点,市售Bio-Glass的商品都已事先连接了氨烷基（烷基胺）。用葡聚糖包被玻璃珠,则可改善其亲水性,并增加化学活性基团。用抗原涂布的玻璃珠已成功地分离了免疫淋巴细胞,在DNA连接的玻璃珠上纯化了大肠杆菌的DNA和RNA聚合酶。 2021/3/26 * （6）其他载体: 由聚丙烯酰胺和琼脂糖混合组成的载体,商品名为Ultrogels ACA。它的特点是载体上既有羟基又有酰胺基,并且都能与配基单独作用。但不能接触强碱,以免酰胺水解,使用温度不超过40 °C。 在丙烯酰胺和琼脂糖的混合胶中加入7%的四氧化三铁,则可制得一种称为磁性胶（Magnogels ACA44）的载体。当悬浮液中含有不均匀粒子时,依靠磁性能将载体与其他粒子分离。磁性胶载体常用于酶的免疫测定、荧光免疫测定、放射免疫测定、免疫吸收剂和细胞分离等的微量测定和制备。 2021/3/26 * 影响吸附亲和力的几个因素: （1）配基浓度; （2）空间障碍; （3）配基与载体的结合位点; （4）载体的孔径; （5）微环境（化学因素）。 2021/3/26 * Concentration 浓缩 浓缩:低浓度溶液通过除去熔剂边为高浓度溶液的过程。常在提取后和结晶前进行,有时也贯穿与整个制药过程。 蒸发装置的设计原理:加热、扩大液体表面积、低压。 薄膜蒸发浓缩Film evaporation concentration 卧式喷淋降膜蒸发器、Rose蒸发器、板式蒸发器 减压蒸发浓缩Decompression evaporation concentration 减压抽真空（真空浓缩）,适用不耐热的药物和制品。 薄膜蒸发流程图 2021/3/26 * 吸收浓缩Absorbing concentration 通过吸收剂直接吸收除去溶液中的溶剂分子使溶液浓缩的方法。吸收剂与溶液不起化学反应,对生化药物不起吸附作用,易与溶液分开。吸附剂除去溶剂后可重复使用。 常用的吸收剂:聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、凝胶。 凝胶可直接投入待浓缩的溶液中,溶剂和小分子被吸收到凝胶内,大分子留在溶液中,然后离心过滤。使用聚乙二醇时,先将溶液装入半透膜的袋内,扎紧袋口,外加聚乙二醇覆盖,袋内溶剂渗出即被聚乙二醇吸去。 2021/3/26 * Crystallization 结晶 结晶:利用某些药物具有形成晶体的性质是目标药物（溶质）呈晶态从溶液中析出的过程。 结晶的条件: （1）纯度purity:各种物质在溶液中均需达到一定的纯度才能析出结晶。蛋白质和酶,纯度不低于50%。总趋势是越纯越易结晶,但已结晶的制品不表示达到了绝对的纯化,只能说到了相当纯的程度。有时纯度不高,但加入有机溶剂和制成盐,也能达到结晶。 2021/3/26 * （2）浓度consideration:结晶液的浓度要较高,以利于分子间的碰撞聚合。但浓度过高,相应杂质和溶液黏度增大,反而不利于结晶,或生成纯度较差的粉