寄生虫实验技术.pptVIP

2021/3/27 * 免疫荧光法 免疫荧光法是对抗原抗体反应进行特异荧光染色的诊断技术。诊断疟疾、丝虫病及血吸虫病、肺吸虫病、华支睾吸虫病、包虫病及弓形虫病等。 1．直接法:每查一种抗原必须制备与其相应的荧光标记的抗体。目前很少应用。 2．间接法:也称间接荧光抗体法。将抗原与未标记的特异性抗体（如患者血清）结合,然后使之与荧光标记的二抗（抗抗体）结合,三者的复合物可发出荧光。 2021/3/27 * 酶联免疫吸附试验 广泛用于多种寄生虫感染的宿主体液（血清,脑脊液等）以及排泄分泌物（尿,乳,粪便等）内特异抗体或抗原微粒的检测。 酶联试验的基本操作过程可分为:①固相包被;②温育洗涤;③加样;④酶结合物反应;⑤底物显色;⑥终止反应读取结果等若干步骤。 2021/3/27 * 斑点ELISA 斑点ELISA（dot-ELISA）是近年新发展的一种ELISA技术,在固相载体上吸附抗原和抗体,然后和被测物反应,底物经酶促反应后形成有色沉淀物使薄膜着色,目测或用光密度扫描仪定量。 dot-ELISA可用来检测抗体,也可用来检测抗原,由于该法检测抗原时操作较简便,故目前多用于抗原检测。 2021/3/27 * 免疫酶染色试验 免疫酶染色试验是以组织切片,印片或培养物涂片用作待检材料进行过氧化物酶特异免疫染色,在光镜下检示样本的特异性抗原。 在蠕虫和原虫感染中均有应用。血吸虫病、丝虫病、囊虫病、华支囊吸虫病、肺吸虫病、包虫病和弓形虫病等。 2021/3/27 * 单克隆抗体 单克隆抗体（McAb）广泛用于寄生虫病临床与实验研究。分型和鉴定;免疫诊断方法以及寄生虫感染免疫,保护性免疫和虫苗制备等方面。 用于疟疾、弓形虫病、血吸虫病、肺吸虫病、棘球蚴病、丝虫病等方面。 2021/3/27 * 检测新技术－分子生物学方法 免疫印渍试验 DNA探针技术 PCR技术 2021/3/27 * 免疫印渍试验 免疫印渍试验是由十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）,电泳转印及标记免疫试验三项技术结合而成的一种新型的免疫探针技术,是分析蛋白抗原、鉴别生物学活性抗原组分的有效方法。 应用于检测寄生虫感染宿主体液内针对某抗原的抗体,是一项高敏感和高特异的诊断方法,具有很大发展潜力。 2021/3/27 * DNA探针技术 DNA探针技术,又称核酸分子杂交技术,敏感性高,特异性强,应用面广。 在寄生虫病诊断中,探针是病原体的特异核酸序列,可用来检测出病原体是否存在。 在寄生虫病的诊断、现场调查、寄生虫种的鉴定及分类等方面的研究中均已使用。 2021/3/27 * PCR技术 检测病原体遗传物质用以诊断寄生虫病的方法,聚合酶链反应（polymerase ? chain? reaction,PCR）是一种体外扩增特异性DNA技术。 现已使用PCR技术于寄生虫病诊断,如锥虫病、利什曼病、肺孢子虫病、肠球虫病、贾第虫病、弓形虫病等。 2021/3/27 * 寄生虫实验技术 病原学检查 血清学检查 2021/3/27 * 病原学检查 粪便检查 血液检查法 排泄物与分泌物等的检查 其它组织器官检查 2021/3/27 * 粪便检查 直接涂片法 厚涂片透明法 浓聚法 沉淀法 毛蚴孵化法 浮聚法 肛门拭子检查法 试管滤纸检查法 虫卵计数法 定量透明法 淘虫检查法 带绦虫孕节检查法 2021/3/27 * 直接涂片法 检查蠕虫卵、原虫包囊和滋养体。 简便,连作3次以提高检出率。 滴一滴生理盐水于载玻片,用牙签挑取绿豆大小的粪块,在生理盐水中涂抹均匀;厚度以可辨认下面的字迹为宜。也可固定后染色。一般在低倍镜下检查,用高倍镜观察时加盖片。 检查包囊时用碘液。 检查隐孢子虫卵囊时用金胺酚改良抗酸染色法。 2021/3/27 * 厚涂片透明法 取约5mg粪便,置于载玻片上,覆以浸透甘油－孔雀绿溶液的玻璃纸片,轻压,使粪便铺开。置于30～36℃温箱中约半小时或25℃约1小时。待粪膜稍干,即可镜检。 2021/3/27 * 沉淀法 原虫包囊和蠕虫卵等比重大时效果较好。 重力（离心）沉淀法:取粪便20～30g,加水混悬后用2～3层湿纱布过滤;滤液静置25分钟或离心（1500～2000rpm）1～2分钟,重复洗涤直至上清液清澈为止。最后取沉渣涂片镜检。 检查包囊时,换水间隔时间宜延长至约6h。 2021/3/27 * 浮聚法 利用比重较大的液体,使原虫包囊或蠕虫卵上浮,集中于液体表面。检查钩虫卵效果最好。 饱和盐水浮聚法:取黄豆粒大的粪