细胞染色专题之一台盼蓝精.docxVIP

细胞染色专题之一：台盼蓝 台盼蓝（Trypan Blue也称Direct blue 14:一种死细胞染色用色素 化学名： 3,3-{[3,3-Dimethyl（1,1-biphe nyl-4,4-diyl]bis（azo}bis（5-amin o-4-hydroxy-2,7- naphthalenedisulfonic acid, tetrasodium salt3,3{[3,3 -二甲基-（1,1 -二苯基-4,4 -二基] 双（偶氮}-双（5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸，四钠盐分子式：C34H24N6Na4O14S4 分子量:960.81 CAS Number: 72-57-1 外观:黑褐色结晶粉末 摩尔吸光度:69,000（在 606nm附近 染色原理： 细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合,使其着 色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说 ，台 盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经 死亡。这被称为染料排除测试（dye exclusion,Erythrosin B（红色、negrosine eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色 的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。 溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色。 台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时，细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直 接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。 应用于细胞凋亡: 如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞 膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期 检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。 储存条件：常温保存 注意事项： 台盼蓝对人体有毒 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便,对贴壁细胞来说，较为繁琐。因 为要消化，有时,96孔板不一定能消化干净。而且，该法是测定细胞浓度的方法，与细 胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说，该法相对准确, 可能有一些人为因素的干扰。 细胞染色专题之二：美蓝 美蓝 英文名：Methylene blue,Swiss blue 中文名:亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、 碱性亚甲天蓝等。 分子式:C16H18CIN3S 分子量:319.85 g/mol CAS Number:61-73-4 EINECS Number: 200-515-2 熔点:100 c 沸点:分解 吸收峰:668nm和609nm。 染色原理： 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细 胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极 弱,而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴 别酵母菌的死细胞和活细胞。 细胞染色专题之三：吖啶橙 吖啶橙：N,N,N,N-tetramethylacridine-3,6-diamine 中文名:3,6-双（二甲基氨基吖啶 英文名:Acridine Orange（ AO,Euchrysine,3,6-Acridinediamine,Waxoline Orange A,Acridi ne Orange Base,Solve nt Orange 15,Rhoduli ne Oran ge, Rhoduli ne Orange N,Acridi ne Orange NO,Rhoduli ne Orange NO,Basic Oran ge分 子式:C17H19N3 分子量:265.35 g/mol CAS number:10127-02-3 外观:橙色、红棕色粉末 染色原理： 吖啶橙（AO与双链DNA形成发绿色荧光的复合物。AO还可与单链DAN或 RNA形成发红色荧光的复合物。一个 AO分子嵌入双链DNA的三个碱基对并发出 最大波长为526nm（激发502nm的绿色荧光。一个 AO分子与单链DNA或RNA的 一个磷酸基相互作用形成聚集或堆叠的结构，此结构发出最大波长为650nm （激发 460nm的红色荧光。因此，AO用于被利用来检测双链 DNA和单链DNA或RNA 它使得用氩激光激发器或流式细胞仪同时测定 DNA和RNA成为可能。光谱数据 与DNA作用时和荧光素相似，激发最大波长502nm,发射最大525nm（绿光。于 RNA作用时,激发最大波长移动到460nm（蓝光,发射最大移动到6