大肠杆菌培养基配制及培养方法计划.docxVIP

精品文档 精品文档 羂 虿莇PAGE PAGE3 精品文档 PAGE 大肠杆菌培养 一、菌种冻存液的制备 含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量 40%甘油，-80oC冻存。 二、培养基制备 LB培养基配方（胰化蛋白胨（ Trypton）：10g/L；酵母提取物（ Yeast Extract）：5g/L；NaCl：10g/L；pH7.4） 液体培养基 胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂 三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/LHCl回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在 分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有 锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅 121oC灭菌15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内 60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥 后取出。液体培养基可直接保存或