薄层色谱鉴别介绍.pptVIP

2021/3/26 * D1滤纸 纸色谱中所用的滤纸性质对分离效果有很大影响。 对滤纸的要求是: 物理性质均匀、 质地均一、厚薄一致,否则斑 点畸形,Rf值改变; 2. 具有一定的机械强度; 3. 纤维松紧程度适当; 4. 具有一定的纯度; 5. 纸面洁净,不含有溶于水及有机溶剂的物质。 D 薄层板类型的影响 2021/3/26 * 色谱用滤纸纤维的方向会影响组分的分离,故每次展开时,滤纸的纤维方向应一致. 商品滤纸有厚纸、薄纸、慢速、快速、中 速等不同类型可供选择. 2021/3/26 * D2薄层板 有资料表明,60%以上的薄层分离用硅胶作为吸附剂,其次为纤维素、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。 固定相 2021/3/26 * 硅胶 硅胶是一种弱酸性的多孔性无定形吸附剂。 硅胶表面有很多硅醇基(－Si－OH),通过硅原子上的-OH基团与极性化合物或不饱和化合物形成氢键而表现出吸附性能。硅醇基的数目越大,则吸附能力增强。 硅胶也能吸附水分而成为水合硅醇基。 2021/3/26 * 氧化铝 氧化铝由氢氧化铝高温脱水而成。按制备方法不同,氧化铝可分为三种: 碱性氧化铝:pH = 9～10,可分离合成染料,生物碱等 酸性氧化铝:pH = 4～5,适应于酸性物质的分离 中性氧化铝:pH = 7～7.5,适于分离醛酮,以及对酸碱 不稳定的脂和内酯等化合物 氧化铝的活度与其含水量有关,含水量大,则吸附能力小。 活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 含水量% - 3 6 10 15 2021/3/26 * 纤维素 纤维素分子中带有许多羟基,亲水性 强,分离原理与纸色谱相似,但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳,可以代替纸色 谱. 2021/3/26 * 普通纤维素:天然纤维素、高纯度纤维素、微晶纤维素。 乙酰化纤维素:用乙酸将纤维素结构上的 羟基酯化而成,适用于反相色谱。 离子交换纤维素:纤维素经化学反应,使 分子中一部分羟基上的氢被阳离子或 阴离子交换基取代而成,具有离子交换树 脂的性质。 纤维素的种类有: 2021/3/26 * 聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子聚合物。薄层色谱中常用的聚己内酰胺,结构如下: 酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。 应用:蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。 [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n H O 2021/3/26 * 葡聚糖 葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有机相中,加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团,则可成为亲脂性凝胶。 在葡聚糖凝胶上引入羧甲基、磺乙基等,则制成具有离子交换性质的葡聚糖凝胶离子交换剂。 应用:蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离 2021/3/26 * 薄层板的种类 载板材料:玻璃片、铝箔、塑料片等 薄层板类型: 硬板:在固定相中加入粘合剂（煅石膏、淀粉）; 软板:不加粘合剂; 烧结玻璃板:将玻璃粉与硅胶、氧化铝等吸附 剂按一定比例混合后,以丙酮、乙醇或水等溶剂 调成匀浆,涂成薄层,经高温烧结而成。 2021/3/26 * 吸附剂及预制板包装上的符号及含义 G——加入一定的煅石膏作粘合剂 H——不加粘合剂,供制各种软板用 F254——加入对254nm波长能发荧光的物质 F254s——加入抗酸性荧光指示剂 2021/3/26 * 2021/3/26 * 2021/3/26 * 2021/3/26 * E 温度的影响 温度影响物质的分配系数KD,同时也影响纤维的水合作用,改变固定相的量。 2021/3/26 * 2021/3/26 * F 展距的影响 2021/3/26 * 薄层色谱法---跑板 点样???? 用微量进样器进行点样。点样前,先用铅笔在层析上距末端2cm 处轻轻画一横线,然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。如果要重新点样,一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样（用电吹风的热风吹干再点）,以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm,不宜超过5mm。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线距基线1～2．5cm,点间距离为lcm左右,样点与玻璃边缘距离至少lcm,为防止边缘效应, 2021/3/26 * 2.展开???? 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中,由于毛细管作用,展开