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专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 单卵孪生：一个受精卵发育成两个胚胎； 可在3个阶段形成： 卵裂阶段→两个胚泡; 早期胚泡 → 两个内细胞群； 二胚层胚盘阶段 →两个原条。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 性别和相貌相同； 血型和遗传基因相同。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 四、胚胎干细胞 （ 一）胚胎干细胞的培养过程 * * * * * 由于胚胎不同发育时期生理代谢的需求不同，进行胚胎体外培养时必须配制一系列含有不同成分的培养液用以培养不同发育时期的胚胎。 * * 促卵泡素（FSH）是垂体前叶分泌的一种激素。垂体是位于脑基底部的小腺体。FSH可促进卵巢中卵泡的发育，每个卵泡中包含一个成熟的卵子。这些卵泡成熟时，会分泌雌激素，后者会刺激母猪表现出典型的静立发情行为。 　　促黄体素（LH）刺激卵巢排卵。促黄体素也是由垂体前叶分泌的。卵泡破裂释放出卵子之后，破裂卵泡内的细胞继续发育，形成黄体。黄体分泌孕酮。孕酮是负责维持妊娠的主要激素。如果卵子受精，成为有活力的孕体，这些孕体就会在结合在子宫壁上。这种结合的信号会反馈给黄体，使黄体继续分泌孕酮，维持妊娠。 * * * * * 激素：激素对细胞的作用是多方面的。胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。促生长激素：促细胞增殖效应。氢化可的松：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的氢化可的松，如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。 * * * * * 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 4、选择的胚胎： 发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚。 5、使用的主要仪器： 实体显微镜和显微操作仪。 6、具体操作 用分割针或分割刀片将胚胎切开，吸出其中的半个胚胎，注入预先准备好的空透明带中，或直接将裸半胚移植给受体。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 发育良好的胚胎 切割针/刀或酶处理 细胞分散开 受体 多个受体 移植 体外培养至囊胚 移植 培养液 胚胎分割操作过程 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 7、操作注意事项： ①对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均等分割。 原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育提供营养。 若分割时不能将内细胞团均等分割，会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发育不良，甚至不能发育等问题。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 7、操作注意事项： ②胚胎分割的份数越多，操作的难度会越大，移植的成功率也越低。 早期胚胎的体积很小，只有在显微镜下才能看到；再者，细胞数目是有限的。分割的份数越多，不但难以做到均等分割，每一份的细胞数会越少，而且作为囊胚期的胚胎内细胞团细胞所受的影响会更大。 因此，分割的份数越多，技术的难度会越大，移植后的恢复和发育的难度会越大，移植成功率自然会降低。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 性别鉴定 同卵双生 错开季节的同卵双生犊牛 牛胚胎分割的主要用途 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 8、胚胎分割技术的缺陷 （1）刚出生动物的体重偏低，毛色和斑纹还存在差异； （2）采用胚胎分割技术产生同卵多胎的可能性是有限的。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 胚胎不能无限分割，那么有没有别的办法实现优良个体的多胎繁殖呢？ 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 胚胎干细胞 阅读课本，思考以下问题： （1）什么是胚胎干细胞？ 简称是什么？ （2）胚胎干细胞的来源。 （3）胚胎干细胞的特性。 （4）胚胎干细胞的应用。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 1.概念： 简称ES或EK细胞,是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞。 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 全能细胞 囊胚 胎儿 内细胞团细胞 生殖腺细胞 受精 胚胎干细胞分离培养 分离内细胞团 胰蛋白酶处理 转入培养皿中培养 不加饲养层细胞培养 细胞分化 饲养层的细胞一般是胚胎成纤维细胞，因为胚胎成纤维细胞可以分泌一些能抑制细胞分化的物质，满足促进干细胞生长的同时抑制干细胞分化的条件。 EK细胞 加饲养层细胞 培养 ES细胞 专题三体外受精以及早期胚胎培养讲义 2.特点: （1）形态： 体积小,细胞核大,核仁明显； （2）功能： 具有发育的全能性,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞; （3）在体外培养的条件下，ES细胞可以增殖而不发生分化。对它可以进行冷冻保存，也可以进行遗传改造