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基因治疗与基因诊断What? is Gene Therapy?Gene therapy is the introduction of genetic material into cells for therapeutic purposes One major goal of gene therapy is to supply cells with healthy copies of missing or flawed genes 基因治疗概况基因治疗概况基因治疗，是基于修饰活细胞遗传物质而进行的医学干预，是一种以预防和治疗疾病为目的的人类基因转移技术。即：以改变细胞遗传物质为基础的生物医学治疗。基因研究与治疗发展历程发现DNA双螺旋结构在大肠杆菌中成功表达胰岛素美国批准第一个体细胞基因治疗方案，治疗严重综合性免疫缺损症 人类基因组计划“工作草图”绘制完毕19821997200419731953197819902000第一个基因工程药物重组人胰岛素上市基因治疗产品上市英国培养出第一只克隆羊多莉建立DNA重组技术 基因治疗的发展史及研究概况 1967年Nirenbeg首先提出基因工程可用于人类疾病治疗的设想。1980年Cline首次将外源基因转导入小鼠获得成功，次年对2名重症β-地中海贫血患者进行治疗，虽未获成功，1985年美联邦国家卫生研究院(NIH)成立了基因治疗委员会，并于1989年首次批准Arderson等将抗新霉素基因导入黑色素瘤患者的肿瘤侵润淋巴细胞(TIL)作为标记基因。1990年Blaese将正常人的腺苷脱胺酶基因导入2名腺苷胱氨酸（ADA）缺乏症患者的淋巴细胞获得成功，成为医学史上的重要里程碑。1991年Szczylik 等在小鼠慢粒白血病模型上，将反义寡核苷酸导入肿瘤细胞，阻断了癌细胞的增殖. 在我国，1991年12月复旦大学遗传研究所与第二军医大学长海医院合作，以携带凝血因子IX基因的反转录病毒作为载体，对两例血友病B患者进行了首次基因治疗。基因治疗概况基因治疗对象威胁人类健康的重大疾病 恶 性 肿 瘤 心 血 管 疾 病 遗 传 病 感 染 性 疾 病基因治疗概况基因治疗药与基因工程药DNARNAPROTEIN基因治疗药基因工程药基因治疗概况基因治疗要素基因治疗制品治疗基因载体靶细胞基因治疗概况基因治疗策略 基因替代（Gene Replacement） 基因修复（Gene Modification） 基因添加（Gene Addition） 基因失活（Gene block）最理想的方式目前的主要方式基因治疗概况基因治疗种类 体细胞基因治疗 生殖细胞基因治疗基因治疗的途径因受体细胞的不同分为两种：① 生殖细胞基因治疗(germ cell gene therapy)：是将正常外源基因转移到患者的生殖细胞(精细胞、卵细胞及中早期胚胎)中，使子代成为正常的个体。由于此法改变了生殖细胞的遗传物质，影响人类基因构成，并影响到子代的发育，同时涉及一系列的伦理问题，美联邦国家卫生研究院(NIH)目前规定禁止用于人类，仅可用于动物实验研究。② 体细胞基因治疗(somatic cell gene therapy)：是指将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，从而达到治疗目的。由于该疗法只涉及体细胞的遗传改变，而不影响子代，故到目前为止，人类所进行的基因治疗，均为体细胞基因治疗 基因治疗概述基因治疗途径体外基因治疗(Ex vivo)：从病人体内获取细胞，体外培养并进行基因转移后，重新输入患者体内前列腺癌细胞转染细胞因子基因后回输到患者体内，肿瘤转移灶被T细胞及NK细胞附着。基因治疗概况基因治疗途径体内基因治疗(In vivo)：直接将基因或改造后的病毒(插入目的基因)导入人体患病组织中携p53基因的重组腺病毒导入人体肿瘤组织引起肿瘤细胞裂解基因治疗的要求是：① 向一定的细胞导入治疗基因；② 输送到细胞核，并整合到DNA的正确位置；③ 稳定的表达，包括转录、翻译、定位和修饰。基因治疗的途径选择靶细胞的原则是： ① 必须较坚固，足以耐受处理，易于由人体分离并便于回输。 ② 具有增殖优势，生命周期长，能存活几个月甚至几年，最好可延续至病人的整个生命期。 ③ 易于受外源性物质的转化。 目前使用较多的是骨髓干细胞、皮肤成纤维细胞、肝细胞、血管内皮细胞和肌细胞等。肿瘤基因治疗常用的靶细胞是肿瘤细胞自身，其次是淋巴细胞和造血干细胞。 基因转染/转导的方法基因转移方法分三类： ① 化学法：包括磷酸盐沉淀、脂质体(Plasmid-liposome complex)包埋、多聚季铵盐和DEAE-葡萄糖等化学试剂转移。这些方法通过改变细胞膜的通透性或增加DNA与细胞的吸附而实施基因转移。② 物理法：包括电穿孔、显微注射、裸露DNA直接注射、颗粒轰