pcr技术(环境微生物).ppt

循环n PCR扩增的特异性是由一对寡核苷酸引物所决定的。反应初期，原来的DNA担负起使模板的作用，随着循环次数的递增，由引物介导延伸的片段急剧增多而成为主要模板，最终的扩增产物是介于两种引物5’ 端之间的DNA片段。 标准的PCR反应体系：  10×扩增缓冲液 　 10ul  4种dNTP混合物 　 各200umol/L  引物 　　　　 　 各10～100pmol　  模板DNA 　　　 　0.1～2ug　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　  Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L  加双或三蒸水至 　100ul  三、PCR的成分和作用： 1. 缓冲液： 10 ～ 50 mM Tris- Cl （三氨基甲烷）(pH8.4) 维持 Taq 酶作用环境的偏碱性 25 ～ 50 mM KCl 促进引物退火，50 mM 会抑制 Taq 酶的活性。 100μg / ml 牛血清白蛋白 (BSA) 对酶有一定的保护性，如质量不好将起相反的作 用，建议使用乙酰化的 BSA。明胶、Tween-20、 二硫苏糖醇 (DTT) 也有类似作用。 2. MgCl2: 1.5 ～ 2.0 mM Taq 酶具有 Mg2