第十二章遗传工程幻灯片讲义PowerPointPre.pptx

第12章 遗传工程 ;本章教学时数：2学时。 本章重点：基因工程的基本流程。 本章难点：分子标记和基因图谱； 研究基因功能的方法 ;§1 遗传工程概述 ;遗传工程的概念;广义遗传工程和狭义遗传工程：;细胞工程;第一个哺乳动物的克隆——Dolly羊;酶工程;发酵工程;基因工程;重组DNA技术流程;§２ 基因工程的工具酶;限制性内切核酸酶;Eco R Ⅰ;限制性内切核酸酶的命名原则：;;限制酶的分类;Ⅰ型限制酶;Ⅲ型限制酶;Ⅱ型限制酶;酶切与连接;常见内切酶;DNA连接酶(DNA ligase);反转录酶reverse transcriptase; §3 载体(vector);常用载体：;载体的基本条件;质粒载体①分子量小(2.69kb),但能携带较大的外源片段；②拷贝数多,在每个宿主细胞可达500个；③酶切位点多，克隆方便；④具有α-互补显色表型,便于检测。 ;互补显色反应 ;λ噬菌体（30kb） ;粘粒（cosmid）载体（45kb）;细菌人工染色体BAC（300kb）bacterial artificial chromosome;YAC（1Mb）yeast artificial chromosome;Ti质粒;Ti质粒结构;§4 基因的分离与鉴定 ;(一)从基因库中分离基因 ;1．构建基因库 ;基因组文库 Genomic DNA library;cDNA文库;基因组文库与 cDNA文库的比较：;从基因库中筛选特定的克隆;DNA探针（probe）;筛选文库;阳性克隆的分析与鉴定 ;核酸序列测定的原理;磷酸二脂键;测序电泳图谱;核酸序列分析与功能预测;开放阅读框（open reading frame, ORF）分析;开放阅读框（open reading frame, ORF）分析; TGCTCGCTCCTACGAATCCTGCCCCTGAGTAACAATGACTGACTTTTAATTTGTTTGCAG 61 CTAGGGTGGGGATCGAGATGGTGATCTTGGAGCAGCCACAGCTGCTCCTTCTTCTTCTTC 121 TTCTTGTAGCAGCTGCAGCTGCAACCGGCGCCACAGCAGCCGACGACGAGTTGGAGTGTC 181 CCTCCTCCATCTTCGGTAAGTAGCAAAGCACAGTATGACATTCACGAATGCATGTCATGA 241 TCTATCACTCCCTTTGTCTTCGCTACATTACATACTCTGCCTGTGTTTACCTACTGTACC 301 CGTCTTCAATTCAATTTGCTGTTGGCTCCCGCGCTTTCCCGAAGCCGCGTGTAGTAGTAT 361 CATAAAAGTAGGAGTAGATCTTTAATTTGCCCGGCGAAAACTGCTCCTAGTGGTAGATCT 421 TTGGCTCGGATCGGAGAAGATATTGTAGCTGTACTCTGATCGAGAGCATGCATGCTTGTT 481 AATCCGATCGAGCGTATTCCTCTGAGTTTGTTATGCTCTGATATTGTAATTGTGGCTGGA 541 TAATTTTCAAGAAAAAAAAATCGGTTACATACATGCATTTGCACTAATTAACTAGATTGT 601 GCATCAACAGATCACGCTGTGAACTCTCAAGGCGCCATTCAGTTCCCCGTGTTCCACAAG 661 AAGCACCAATGCCTCCGCCCATGGTCTGTCCGTGCAACCCAGGCATCCTCGACCGGAGCA 721 TCAGGAGCAGGAAAAGGAGGAGGATTGAACAATCTACAGGAAGAGGAGATCACTTCATCA 781 AGTAGTACAAAAATCGACGTGATCGAAGACAGCAGCATCAACGACTTCCTGTTCCTAATG 841 GCCGTCAGTCTGGGCAAGCCACCGGTTGTGAACCTGGTGGCGATCGACACGGGATCCACC 901 CTCTCGTGGGTGCAATGCCAGCCGTGCGCGGTGCACTGCCACACGCAGTCCGCGAAGGCC 961 GGCCCGATATTCGATCCCGGCAGATCCTACACATCCCGGCGAGTTCGCTGCTCGTCGGTC 1021 AAGTGCGGCGAGCTGAGGTACGATCTGCGGCTCCAGCAAGCCAATTGCATGGAGAAGGAA 1081 GACAGCTGCACGTACAGCGTCACGTACGGGAACGGGTGGGCGTACA