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2021/4/26 Ⅱ非上皮性标志物 1.波形蛋白（Vimentin） 绝大多数间叶组织肿瘤阳性表达。 但肾细胞癌、肺大细胞癌、子宫内膜癌，甲状腺癌可呈阳性表达。 恶性纤维组织细胞瘤Vimentin阳性 2.肌组织标志物 ① 结蛋白（desmin）：平滑肌及横纹肌肿瘤的标志物 ② 肌动蛋白（actin）：平滑肌及横纹肌肿瘤的标志物 ③ 肌红蛋白（myoglobim MG）：横纹肌及其肿瘤的标志物 胃黏膜肌层Desmin阳性 平滑肌肉瘤SMA阳性 扁桃体外横纹肌Actin-Sarcomeric阳性 3.内皮细胞及其肿瘤标志物 ① 第八因子相关抗原(F8):血管瘤及高分化血管肉瘤表达，低分化血管肉瘤不表达 ② CD34：血管良恶性肿瘤及胃肠间质瘤 血管F8因子阳性 小血管内皮细胞CD34阳性 4.组织细胞标志物 ① CD68 ② 溶菌酶（Lysozyme） 特异性不强、两者联合应用较好 肝脏kupffer细胞 CD68 AEC染色 恶性纤维组织细胞瘤 溶菌酶 AEC染色 Ⅲ淋巴造血组织标志物 1.白细胞共同抗原(LCA, CD45)，浆细胞及R-S细胞不表达。 2.CD3 CD45RO T细胞及T细胞淋巴瘤 3.CD20 CD79α B细胞及B细胞淋巴瘤 4.CD15 CD30 经典型霍奇金淋巴瘤R-S细胞标记物。 5.髓过氧化物酶(MPO) 急性粒细胞白血病、粒细胞肉瘤。 扁桃体CD3（T细胞标志物） 扁桃体CD20(B细胞标志物) 霍奇金淋巴瘤 CD15 R-S细胞标记物 Ⅳ神经源性肿瘤标志物 1.胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 各种胶质瘤及室管膜瘤表达， 可与脑膜瘤鉴别; 少突胶质瘤阴性。 脑胶质瘤GFAP Ⅳ神经源性肿瘤标志物 2.S-100蛋白:　神经鞘瘤、少突胶质瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤，软骨及脂肪组织肿瘤敏感性高、特异性较差 恶性黑色素瘤S-100 Ⅳ神经源性肿瘤标志物 3.神经纤维细丝蛋白（NF） 神经节瘤、神经母细胞瘤、嗜铬细胞瘤表达。 脑胶质瘤NF ㈦LSAB法或SP法 为了解决ABC法存在的问题，90年代初提出了用链卵蛋白素替代卵白素生物素复合物。该物质是从链菌属蛋白中分离出来的一种蛋白，有四个和生物素亲和力极高的结合点。 LSAB法是目前国内使用最广泛的一种方法，它敏感性强，效果好，背景清晰，无杂质。 ㈦LSAB法或SP法 优点： 1.不需预先形成复合物，分子体积小，行动灵活，对组织参 透性强。 2.链卵蛋白素的等电点为5.5-6.7，接近中性，不易与组织中的 正电荷发生相互吸引，因而可降低背景的染色。 3.链卵蛋白素不含糖基，不存在与组织中含糖基类的物质起 反应的现象。 4.链卵蛋白素有4个与生物素结合的点，它们可以全部和二 抗上的生物素结合，从而增加其敏感性。 ㈦LSAB法或SP法 5.节省时间，每种抗体的孵育时间都在10-30min左右。 6.抗体可以高度稀释，增加标记病例，降低成本。 7.背景清晰，无非特异性染色，阳性物突出，明显易 辨。 8.染色时间短，提高了染色的成功率，减少了反复制 作的机会，提高工作效率。 ㈧二步法EnVision Systems 该法是近几年在国内推广使用的一种方法，它的原理是将多个抗鼠和抗兔IgG分子与辣根过氧化物酶聚合形成复合物后，可直接与抗原抗体复合物聚合在一起，经DAB显色即可完成染色。 ㈧EnVision TM Systems 评价： 敏感性更高，效果更好。 步骤减少，省时省力。 抗体的孵育时间可节省。 该系统不含有生物素，可以免除由内源性生物素所造成的背景染色。 背景清晰干净，阳性物突出明显。 三、常用免疫组织化学染色方法 (注：下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行) ㈠ABC法 切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。 切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。 无水酒精Ⅰ 30秒。 无水酒精Ⅱ 30秒。 95%酒精Ⅰ 30秒。 95%酒精Ⅱ 30秒。 90%酒精 30秒。 80%酒精 30秒。 70%酒精 30秒。 自来水洗。 0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 水洗。 抗原修复。 PBS洗3次，1分钟/次。 加入血清孵育20分钟。 注: 后面所述各种方法中的切片脱蜡至水同上述ABC法中1-10步骤. (一)ABC法 加入二抗孵育30分钟。 PBS洗3次，2分钟/次。 加入ABC复合物，孵育30分钟。 PBS洗3次，2分钟/次。 DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。 PBS洗，水洗。 Harris苏木素染核5-10分钟。 水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 (二)LSAB法 (SP法) 切片脱蜡至水。 0.3%H2O2甲醇处理切片10-20mi