《应用酶学》第6章茶用酶制剂的生产.ppt

从自然界中分离筛选菌种的方法步骤 1、诱变育种的一般步骤和方法出发菌株同步培养 使菌细胞处于相同或接近的生理状态单细胞（或单孢子）菌悬液的制备 单细胞或单孢子的意义 酵母或霉菌孢子106 /ml 、细菌108 /ml 诱变剂的选择及其剂量的确定 以致死率为90％～99％ 为宜诱变处理 ① 物理诱变剂 ② 化学诱变剂 确定出发菌株 ↓ 菌种的纯化选优 ↓←出发菌株的性能鉴定 同步培养 ↓ 制备单细胞（或单孢子）悬液 ↓←活菌浓度测定 诱变剂的选择与确定诱变剂量的预试验 ↓ 诱变处理 ↓ 平板分离 ↓计形态变异的菌落数，计算突变率 挑取疑似突变菌落纯培养 ↓ 突变体的初步筛选 ↓←用简单快捷的方法 重复筛选 ↓←摇瓶发酵试验 选出突变体（根据情况进行生产试验或重复诱变处理） 2、中性蛋白酶的生产 第三节 培养基 培养基是供微生物生长、繁殖和代谢的需要及合成酶的营养物质。 培养基成分和配比合适与否，对微生物的生长、酶的生物合成和提取工艺，甚至最后对成品的产量和质量都会产生相当大的影响。 良好的培养基配比可以充分发挥生产菌种合成酶的能力，使之获得最大的生产效果。 培养基的配比随着生产实践的不断进展、原料来源及成本、菌种不断更新与发酵条件的不断改进而随时加以调整或改变。 一、培养基的营养要求 水、碳源、氮源、无机盐和生长素－培养基的五要素 1、水 培养基需要以水为介质，微生物的生长必须有水，水是组成微生物细胞的主要成份。 水在培养基中的主要功用有： （1）水是良好的溶剂； （2）水是生活细胞中一切反应的媒介物； （3）水能维持细胞中的渗透压； （4）水是热的良好导体。 发酵所用的水主要为自来水，还有深井水和江河水等 一、培养基的营养要求 2、碳源 碳源是用来供给微生物细胞生命活动所需要的能量和构成菌体细胞以及各种代谢产物的物质基础（代谢产物中的碳架）。 碳源不仅需要量大，而且是主要的营养要素，是酶制剂发酵的主要原料之一。 大量的农副产物是主要的有机碳原料。 微生物的营养类型不同，对碳源要求也不同。 一、培养基的营养要求 3、氮源 氮源是必不可少的重要原料 氮源是组成蛋白质和核酸的主要元素。微生物细胞的原生质是由蛋白质、核酸、脂类和水组成的，酶自身亦为蛋白质。 氮的来源可分为无机氮（硫酸氨、尿素等）和有机氮，豆饼、花生饼粉等农副产物则是常用的有机氮源，其他还有鱼粉，蛋白胨等。 一、培养基的营养要求 4、无机盐和微量元素 主要元素—磷、硫、镁、钾、钙等。 微量元素—铁、锰、锌、铜等。 一、培养基的营养要求 5、生长因子和产酶促进剂 凡能调节微生物代谢活动的微量有机物，都称为生长因子，一般指B族维生素。 如果添加少量物质，就能显著增加酶的产量，这些物质通常称为产酶促进剂。 大部分是诱导物或者表面活性剂 诱导剂一般是底物或者底物类似物 二、培养基的种类 1、斜面培养基 能够使菌种生长繁殖快、健壮，不容易引起菌种变异 2、种子培养基 供菌种生长和繁殖用。 营养要丰富和完全，但营养物质的浓度又不可以太高，以免影响种子的质量，因为种子的质量是决定发酵成败的关键之一。 二、培养基的种类 3、发酵培养基 供菌种生长和发酵产物合成用，要求营养适当丰富和完全，适合菌种的生理特性和要求，使菌种迅速生长、健壮，能在较短的周期内发挥产酶菌合成发酵产物的能力； 同时要注意成本和粮耗。 发酵培养基还要配合发酵装备、培养工艺和通气搅拌性能而选择。 第三节 培养基 三、培养基的选择 以前用单因子实验法，就是根据摇瓶、小罐中做实验，确定效果好坏，以及是否合适推广到发酵罐中。浪费时间，劳动量较大。 现在使用正交实验法，有二因子、三因子和多因子的正交设计，效果好，速度快，减少了实验次数，提高了工作效率。 第三节 培养基 四、选择原料的依据 对于工业上大规模投入生产的原料，除了工艺要求外，还要考虑生产管理和经济上的要求 五、发酵生产的主要原材料 山芋干 、玉米粉 、黄豆饼粉 、麸皮 第四节 灭菌 一、空气过滤除菌 1、介质除菌机理 沉降作用、扩散作用、惯性撞击作用、阻拦作用、静电引力。 2、空气过滤除菌的工艺流程 由高空采集的空气经粗过滤器，进入空压机。空压机出口的空气一般要控制压力2.0kg/cm2以上，此时温度为120～150℃，进入空气贮罐