第15章 DNA重组技术 PPT课件.pptVIP

（三）体外重组： 1、粘性末端连接 2、平末端连接 3、粘平性末端连接 4、同聚物加尾连接 1、转化： 质粒或其他导入原核细胞。 （四）重组DNA的导入： 2、转染： 质粒导入真核细胞。 3、感染： 病毒导入宿主细胞。 遗传学方法： 抗药性标志筛选： 载体携带某种抗生素抗性基因，转化进入宿主细胞后，只含有这种抗药基因的转化子的细菌能够在该抗生素培养基上生长，故可以区别转化菌和非转化菌。 （五）重组体的筛选： 基因工程过程归纳为： 分 分离目的基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体细胞 筛 筛选重组体 表 重组体扩增并表达 1、分 2、切 3、接 5、筛 4、转 6、表达 基因工程与医学 Genetic Engineering and Medicine 一、基因诊断与基因治疗： 基因诊断（gene diagnosis）：是在基因水平鉴定遗传性疾病所涉及的基因结构及表达水平的改变，从而对疾病进行诊断的技术。 基因治疗（gene therapy）：可从基因水平改变细胞中的缺陷基因，或用正常基因矫正、替代缺陷的基因，从而达到治疗目的。 二、疾病相关基因的发现： 生物医学的深入研究表明，人类的各种疾病都直接或间接与基因有关。因此，可认为人类的一切疾病都是“基因病”。 人类疾病可分为三大类： 1、单基因病：这类疾病只需一个基因缺陷即可发生，如腺苷脱氨基酶(ADA)缺陷症。 2、多基因病：此类疾病的病因大多比较复杂，不但涉及各个基因，往往还与环境因素有关,基因缺陷和疾病表型都具有明显的多样性。Ⅰ型糖尿病、肿瘤、心血管疾病等皆属此类。 3、获得性基因病：病原微生物入侵所致，如艾滋病、乙型肝炎等。 三、药物和疫苗的研发： 例如： 重组人胰岛素、干扰素等 重组HBV、HPV VLP疫苗 人源化单克隆抗体，如赫赛汀 美国Eli Lilly公司于1982年首先利用基因工程技术合成人胰岛素并投放市场，标志着生物工程药物时代的开始。 迄今为止，已有50多种基因工程药物上市，近千种处于研发状态，形成一个巨大的高新技术产业，产生了不可估量的社会效益和经济效益。 重组DNA医药产品 产 品 功 能 组织胞浆素原激活剂 抗凝 血液因子VIII 促进凝血 颗粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子 剌激白细胞生成 促红细胞生成素 剌激白细胞生成 生长因子(bFGF, EGF) 刺激细胞生长与分化 生长素 治疗侏儒症 胰岛素 治疗糖尿病 干扰素(? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些肿瘤 白细胞介素 激活、剌激各类白细胞 超氧化物歧化酶 抗组织损伤 单克隆抗体 利用其结合特异性进行诊断试验、肿瘤导向治疗 乙肝疫苗(CHO, 酵母) 预防乙肝 口服重组B亚单位菌体霍乱菌苗 预防霍乱 Thank You! * * 左下角处有超级链接到配伍末端 * * * * * * * * 贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室 贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室 BIOCHEMISTRY 重组DNA技术 Recombinant DNA Technology 第15章 重组DNA技术 1.重组DNA技术的概述 （1）重组DNA技术相关的概念 （2）基因工程的基本原理及过程 2.基因工程与医学 （1）疾病相关基因的发现 （2）生物制药 （3）基因诊断 （4）基因治疗 本章2020年执医考试大纲要求 重组DNA技术的概述 Summary of Recombinant DNA Technology （一）重组DNA技术： 应用酶学的方法，在体外将不同来源的目的基因DNA与载体连接成重组体，该重组体具有自我复制功能，将重组体转入宿主细胞后，使目的基因在宿主细胞中扩增、表达的方法。也称DNA克隆、分子克隆、基因工程等。 一、相关概念： 基因工程（广义） 上游技术 下游 技术 狭义基因工程 重组菌或细胞的培养，表达产物分离纯化与鉴定等 基因工程的目的是获得足够的特异基因，或者是特异基因的表达产物，这些特异基因就是目的基因。 常常是两种类型：cDNA和基因组DNA。 （二）目的基因： 能容纳外源DNA的具有自我复制能力的DNA分子。 外源目的基因无自我复制能力，必须通过载体将其带入宿主细胞，才能实现目的基因的扩增与表达。 （三）载体： 能够自我复制 有多个限制性内切酶 单一位点，便于插入 外源目的基因 有遗传标记，便于筛选 分子量小，便于插入 较大的外源目的基因 载体具备的条件 载体 克隆 载体 表达 载体 外源目的基因的扩增 外源目的基因的表达 常用载体： 质粒、噬菌